Le Fractionnement Cellulaire : Isolement et Caractérisation des Mitochondries

Le Fractionnement Cellulaire :

Isolement et Caractérisation des Mitochondries

Marin Dauguet     marin.dauguet@etu.univ-amu.fr     L1SV Groupe 2A

Introduction

        Les mitochondries sont de petits organites de formes ovoïdes, situés à l'interieur de la plupart des cellule eucaryotes et dont la taille avoisine 1 µm. Celles-ci sont constituées de deux membranes, une externe et une interne qui afin d'augmenter sa surface prend la forme de crêtes. Elles possèdent également l'ADN mitochondrial et de nombreux enzymes, utiles à la traduction et transcription de l'ARNm.

        Mais les mitochondries sont particulièrement utiles dans la respiration cellulaire et la production d'énergie pour le bon fonctionnement de la cellule. Au cours du "cycle de Krebs", le Pyruvate (une molécule à 3 atomes de carbone issue de la glycolyse dans le cytosole de la cellule) va subir des transformations grâce à des réactions d'oxydo-réduction, couplées à la synthèse d'ATP qui use de l'énergie fournies par ces réactions (annexe 1).

        La mitochondrie intègre également la chaîne respiratoire (annexe 2) dans sa membrane interne, processus associant l'oxydation du NADH et FADH2 à la production d'ATP. Ainsi des molécules d'ATP vont être synthétisées par dégradation du glucose à l'aide d'enzymes ATP synthase dans la mitochondrie. Durant la glycolyse, 8 molécules d'ATP sont synthétisées; durant le cycle de Krebs, 24 molécules d'ATP sont synthétisés ; lors de la transformation du Pyruvate en Acétyl-COA, 6 ATP sont générés. La dégradation complète d'une molécule de glucose fournira donc un total de 38 molécules d'ATP, qui sert d'énergie à la cellule une fois transformée en ADP en fonction du besoin énergétique cellulaire.

        Dans ce TP, on cherche à mettre en évidence les réactions d'oxydo-réduction du métabolisme respiratoire. On cherchera au long de nos manipulations à isoler des mitochondries par fractionnement cellulaire (annexe 3) et à étudier l'activité "succinate-cytochrome C réductase" de la chaîne respiratoire à l'aide d'un spectrophotomètre.

Abréviations

ADN : Acide désoxyribonucléique ; ATP : Adénosine-triphosphate ; ADP : Adénosine-diphosphate ; ARNm : Acide ribonucléique messager :

Méthodes et matériels

Résultats et Discussion

Conclusion

Bibliographie

http://bio.m2osw.com/gcartable/mitochondrie.htm

http://www.cycledekrebs.fr/mitochondrie/

http://www.cours-pharmacie.com/biochimie/chaine-respiratoire-et-phosphorylation-oxydative.html

http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/Zsuite/1Respiration/Z999suite/3ChaineRespiratoire/ 1ChainRespiratoire.htm

Annexe

(figure 1)

(figure 2)

Représentation de la chaîne respiratoire chez les végétaux

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