Tp biochimie, test Bradford.

Résultats :

Test Bradford :

Le Bleu de Coomassie G 250 présent dans le réactif de Bradford à la capacité de se lier par interaction hydrophobes aux protéines et ainsi d’exprimer une coloration différente. La forme libre du colorant (anionique) est rouge tandis que sa forme liée (cationique) est bleue.

Ce changement de couleur nous permet donc d’identifier une solution contenant des protéines et de déterminer par la suite sa concentration par mesure de l’absorbance.

On remarque qu’après réalisation du test de Bradford, le tube 1 (tube contrôle) présente une coloration marron foncé.

Le tube 2 contenant la solution X1, du réactif de Bradford et d’eau déminéralisée présente la même coloration que le tube 1, aucun changement de couleur n’est observé.

Le tube 3 contenant la solution X2 et mis en présence de réactif de Bradford a viré au Bleu.

On observe également un léger changement de coloration dans le tube 4 contenant la solution X3 et le réactif de Bradford. Le tube présente une teinte marron très légèrement bleue.

Test au réactif glucose RTU :

Une réaction enzymatique spécifique (glucose-oxydase) oxyde le glucose présent dans l’échantillon en acide gluconique et peroxyde d'hydrogène.

Ce dernier sert de substrat à la peroxydase dans une seconde réaction conduisant à l’oxydation du chromogène incolore en un chromogène coloré. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration en glucose.

• Le tube 1 contenant de l’eau déminéralisée et du réactif RTU ne présente pas de changement de coloration.
• Le tube 2 contenant la solution X1 et du réactif glucose RTU se colore en rose.
• Le tube 3 contenant X2 et du réactif glucose RTU ne présente pas de changement de coloration
• Le tube 4 contenant la solution X3 et le réactif glucose RTU ne présente pas de changement de couleur.

Test de contrôle de la présence d’acides nucléiques

On met la solution à tester en présence NacL et d’éthanol absolu.

L’éthanol, par sa capacité à être hydrophobe, et en forte concentration, contribue à la précipitation de l’acide nucléique.

Le NacL introduit avec l’éthanol et la solution d’acide nucléique a pour caractéristique d’avoir une haute force ionique et donc de faire beaucoup de liaisons avec l’eau, et ainsi d’empêcher l’acide nucléique de faire des liaisons avec l’eau.

• On observe un précipité blanc dans le tube contenant Nacl, de l’éthanol absolu et la solution X3.  

Mesures d’absorbances et dosage des solutions :

La spectrophotométrie est une méthode qui consiste à mesurer l'absorbance (ou la densité optique) d'une substance chimique en solution. Plus l'échantillon est concentré, plus il absorbe la lumière. La loi de Beer-Lambert régie ce principe.

• Dosage de l’acide nucléique :

• Voir annexe Figure 1

(partie exploitation des données FLO)

• Dosage de la solution de glucide :

Les tubes 2,3,4,5 permettent de tracer la courbe étalon pour le glucide.

Mesures d’absorbances des 5 tubes et concentration de la solution de glucide X2 :  

• Voir Annexe figure 2

• Dosage de la solution de protéine

Les tubes 2,3,4,5,6,7 permettent de tracer la courbe étalon.

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