Rapport de tp biochimie

TP N°1 : Identifications des sucres

1ère partie : Identification des cétoses

1. Le but 

Le  but de cette manipulation c’est l’identification des cétoses dans des solutions de monosaccharides et disaccharides.

      II -Principe 

 L’identification s’effectue à l’aide de la solution colorée de Séliwanoff, dont on se retrouve avec la couleur rouge cerise qui est une caractéristique des cétoses.

      III-Réactifs 

• Solution de Séliwanoff (Résorcinol 0,1% dans HCl 4M)

  -1g de résorcinol

  -1l d’eau distillé contenant 330 ml d’acide chlorhydrique concentré

• Solution sucre à 1%

  -1g de sucre

  -100 ml d’eau distillée

    IV-Mode opératoire 

On introduit 1ml de chaque sucre dans les tubes à essai, puis on ajoute1ml de la solution  Séliwanoff. On place les tubes dans un bain-marie à 100°C pendant 5 minutes. Et enfin on refroidit les tubes  sous un courant d’eau froide  et on  note la coloration obtenue.

   V-Résultats et conclusion 

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Figure1 : Résultats du teste d’identifications des cétoses

D’après les résultats (Figure 1), on constate que la couleur rouge cerise n’apparait que pour le saccharose et le fructose, qui sont donc des cétoses par contre  le glucose, lactose,  mannose et maltose sont des aldoses.

2ème partie : Réaction des sucres avec le DNS

1. Le but 

Le but de cette deuxième partie consiste à déterminer  les sucres réducteurs.

    II-Principe 

La détermination est basée sur la réduction de l’acide 3,5-dinitrosalicylique (DNS) en acide 3-amino, 5-nitrosalicylique qui donne une coloration orange qu’on peut mesurer par la spectrophotométrie à 540nm.

   III-Réactifs 

• Solution d’acide 3,5-dinitrosalicylique (DNS) :

  -1g d’acide 3,5-dinitrosalisylique

  -20 ml de NaOH 2M

  -50 ml d’eau

  -30 g de tartrate de Na et K dans la solution et on dilue à 100 ml

• Solution sucre à 1% :

-1g de sucre

-100ml d’eau distillée

    IV-Mode opératoire 

On prépare les tubes à essai et on ajoute 2ml de sucre et 1ml de DNS. On  mélange, puis on chauffe à 100°C pendant 5 min dans un bain marie, ensuite on refroidit sous un courant d’eau, on  dilue par  10ml d’eau distillée et on observe la couleur obtenue

V-Résultats et conclusion :

[pic 3] [pic 4]

Figure2 : Résultats du teste d’identifications des sucres réducteurs

D’après les résultats (Figure 2), on constate que tous ces sucres sont des sucres réducteurs sauf le saccharose qui est un sucre non réducteur puisque la couleur de ce dernier n’a pas viré  à l’orange .Ce qui est évident, le saccharose  étant formés de glucose et de fructose unis par leur groupements réducteur respectifs (liaisons type 1-2) ne pourra réduire le DNS.

TPN°2: Contrôle de la qualité de lait

1. Évaluation de la charge bactérienne de lait cru

I – Le but

Le bute de cette manipulation étant dévaluer la charge bactérienne dans le lait cru.

II – Principe

La mise en évidence de la charge bactérienne dans le lait est effectuée à l’aide d’une substance coloré (bleu de méthylène) qui donne par réduction un leuco-dérivé incolore.

III – Réactifs   

• Solution de bleu de méthylène
• Echantillon de lait cru

IV – Mode opératoire

On introduit dans un tube à essai stérile 10ml de lait et 1ml de la solution de bleu de méthylène, on bouche le tube de caoutchouc stérile, et on mélange en retournant et redressant deux chaque tube. On porte ensuite au bain-marie la solution retenue.

Et on observe visuellement les résultats toute en observant la teinte du mélange aux temps suivant : Immédiatement après 15min, 1h, et 3h.

V – Résultats et conclusion

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Figure 5 : Résultats de lait cru par rapport à d’autre type de lait

On observe d’après les résultats (Figure 5) que le lait cru à changer immédiatement de couleur lors de l’ajout de bleu de méthylène, cela veut dire que lait cru contient beaucoup de bactérie et il doit être traiter , contrairement au lait UHT qui à rester plus de 2h:30min pour être incolore cela veut dire que le lait UHT ne contient pas les bactéries ou bien il les contient d’une proportion faible et donc ce dernier a subit un traitement poussée.

B .Evaluation du traitement thermique du lait (cru, pasteurisé, et UHT) Détermination de la teneur en lactulose par la méthode de Séliwanoff

I – Le but

Le lactulose est l’unique source de fructose dans le lait, sa détermination par la méthode Séliwanoff s’est révélé une méthode simple et rapide pour distinguer le lait UHT du lait stérilisé et pour identifier tous les échantillons additionnés de poudre de lait.

II – Principe

La teneur en aldose (lactose) ne varie pas au cours du traitement thermique du lait par contre la teneur  en cétose (lactulose) augmente fortement, cela du à l’augmentation de la concentration en lactulose. Alors on peut déterminer la teneur en lactulose pour distinguer entre le lait UHT, le lait pasteurisé par mesure de l’intensité de la coloration qui est proportionnelle à la teneur en lactulose.

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