Tp biochimie expérimentale

Nous avons fait une hydrolyse acide du dipeptide avec de l’HCl 12M, afin de séparer les 2 acides aminés du dipeptide en rompant les liaisons peptidiques. On peut déjà voir sur la chromatographie, qu’au niveau de la première tache de notre hydrolyse(dépôt 5) est même niveau que la tache de Gly, on peut donc déjà supposer que ce dipeptide est constitué de Glycine. Quant au deuxième acide aminés constituant ce dipeptide, on peut le connaître en regardant la chromatographie et en comparant des rapports frontaux, on peut voir que l’acide aminé le plus proche de la 2ème tâche de l’hydrolyse-1d (4) est la leucine, on peut donc en déduire que cette dernière est le deuxième acide aminé de notre dipeptide. Le but était donc de déterminer la composition et la structure du dipeptide, j’en est donc conclue suite à l’hydrolyse acide qui a permit à séparer les acides aminés en rompant les liaisons peptidiques, afin de les déterminer nous avons fait une chromatographie sur couche mince, j’ai malheureusement obtenue une chromatographie faussée, puisque je n’avais pas de tache au niveau du dépôt 4 (j’avais confondu l’hydrolyse 1d et la leucine sur le dépôt 3, j’ai donc utilisé la chromatographie de quelqu’un d’autre pour faire mes rapports frontaux, en comparant les taches des hydrolyses et de nos témoins de Leu et Gly, j’en est déduis que le dipeptide était donc constitué de Gly et de Leu. Afin de déterminer la structure du dipeptide nous avons effectué une réaction dansylation permettant de révéler l’acide aminé en N-Term, nous avions, ensuite, juste à faire une chromatographie sur couche mince afin de déterminer de quel acide animé il s’agissait, le résultat m’a permis d’affirmer que la Gly était en N-terminal et Leu en C-Terminale. L’acide aminé situé à l’extrémité de la chaîne peptidique présente un groupement alpha-amine (résidu N-ter) libre car non engagé dans une liaison peptidique. Il s’agit donc du premier acide aminé. Ce groupement alpha-amine libre peut se condenser, en milieu alcalin, avec le chlorure de dansyle (chlorure de 1-diméthylaminonaphtalène-5-sulfonyle), formant ainsi une liaison relativement stable et donnant un dansylo-peptide. Cette réaction de dansylation doit être suivie d’une hydrolyse acide du dansylo-peptide. Après hydrolyse acide de ce composé (pendant 1 heure et à chaud), on obtient 2 acides aminés libres dont un acide aminé N-ter sous forme de dansyloaminoacide (Dns-aa). Il convient ensuite de procéder à l’extraction du Dns-aa par l’acétate d’éthyle (éther acétique). Il est ensuite possible de réaliser une chromatographie sur couche mince afin d’identifier, par comparaison des rapports frontaux, le Dns-aa. Voici, l’équation de réaction de la dansylation :

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