Purification et caractérisation des propriétés antibiotiques du lysozyme d'oeuf
Guide pratique : Purification et caractérisation des propriétés antibiotiques du lysozyme d'oeuf. Recherche parmi 300 000+ dissertationsPar REXHEPI FJOLLA • 23 Mars 2017 • Guide pratique • 1 090 Mots (5 Pages) • 980 Vues
ORGANIGRAMME : PURIFICATION ET CARACTERISATION DES PROPRIETES ANTIBIOTIQUES DU LYSOZYME D’ŒUF
ŒUF
EXTRACTION : Obtention de la solution mère et de la fraction de départ
Dilution : Blanc d’œuf + Tampon tp10 qsp 200ml
Fraction F0 : 5ml de filtrat + 15ml de Tampon tp10 (dilution au 1/4)
PURIFICATION
Adsorption : 10ml de F0 + 1g de CM cellulose →Agitation, repos 15min, centrifugation
Surnageant = F1[pic 1]
Lavages : Culot 1 + 20ml de Tampon tp10 →Agitation, repos 10min, centrifugation[pic 2]
Surnageant = F2
Culot 2 + 20ml de Tampon tp10 →Agitation, repos 10min, centrifugation
Surnageant = F3[pic 3]
Désorption : Culot 3 + 10ml de Tampon tp10 →Agitation, repos 10min, centrifugation
Surnageant = F4[pic 4]
Culot 4 + 10ml de Tampon tp10 NaCl →Agitation, repos 10min, centrifugation
Surnageant = F5[pic 5]
Culot 5 + 10ml de Tampon tp10 NaCl →Agitation, repos 10min, centrifugation
Surnageant = F6
MESURE DE L’ACTIVITE ENZYMATIQUE
Dilution des fractions :
Fraction | F0 | F1 | F2 | F3 | F4 | F5 | F6 |
Dilution | 1/10 | / | 1/5 | 1/5 | 1/2 | ||
Tp 6.2 µL | 900 | 1000 µL de Fraction | 800 | 800 | 500 | ||
Fraction µL | 100 | 200 | 200 | 500 |
Mesure de l’absorbance :
Cuve : 2,9ml de solution bactérienne + 0,1ml de F0 → Mesure des DO toutes les 15s pendant 5min
Répéter avec F1, F2, F3, F4, F5 et F6
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