Cinétique enzymatique (ADH)
Compte rendu : Cinétique enzymatique (ADH). Recherche parmi 300 000+ dissertationsPar Prisstar • 3 Décembre 2021 • Compte rendu • 1 794 Mots (8 Pages) • 516 Vues
DJABRI Linda
BAUCHET Priscilla Compte rendu du TP n°3 – CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
Groupe : TPA11
L'objectif du TP est de caractériser l'enzyme Alcool déshydrogénase (ADH) vis à vis de l'un ses substrats, l’Éthanol en étudiant la réaction d'oxydation de l'éthanol en éthanal.
CH3-CH2OH + NAD+ = CH3-CHO + NADH + H+
Pour cela, l’étude de l’effet de la concentration en enzyme sur l’activité enzymatique et l’étude de de l’effet de la concentration en substrat sur l’activité enzymatique seront réalisées.
1/ Étude de l’effet de la concentration en enzyme sur l’activité enzymatique
[pic 1][pic 2][pic 3]
Pour la figure 1, La DO augmente de manière linéaire au cours du temps, ce qui correspond à la phase stationnaire, qui est longue même pour une faible quantité de substrat grâce à la présence du semi-carbazide.
[pic 4][pic 5]
[pic 6] | Vstat (M.s-1) | ||||
Ei | [E]MR (M) | dDO/dt (s-1) | Valeur essai | Moyenne | Écart-type |
*E0 | 2,76.10-9 | 0,0040 | 6,43.10-7 | 6,51.10-7 | 0,080 |
2,76.10-9 | 0,0041 | 6,59.10-7 | |||
E1 | 2,07.10-9 | 0,0031 | 4,98.10-7 | 4,98.10-7 | 0,000 |
2,07.10-9 | 0,0031 | 4,98.10-7 | |||
E2 | 1,38.10-9 | 0,0020 | 3,22.10-7 | 3,38.10-7 | 0,160 |
1,38.10-9 | 0,0022 | 3,54.10-7 | |||
E3 | 6,89.10-10 | 0,0012 | 1,93.10-7 | 1,77.10-7 | 0,160 |
6,89.10-10 | 0,0010 | 1,61.10-7 |
Pour la figure 2, v augmente proportionnellement avec [E]MR (on verra avec la partie 2 si cela est vrai quelle que soit la concentration en substrat).
[pic 7]
2/ Étude de l’effet de la concentration en substrat sur l’activité enzymatique
[pic 8]
[pic 9]
[pic 10]
[pic 11]
Si | [S]MR (M) | dDO/dt (s-1) | Vstat (M.s-1) |
**S1 | 0,40 | 0,0040 | 6,43.10-7 |
S2 | 0,20 | 0,0036 | 5,79.10-7 |
S3 | 0,12 | 0,0032 | 5,14.10-7 |
S4 | 0,040 | 0,0018 | 2,89.10-7 |
S5 | 0,013 | 0,00080 | 1,29.10-7 |
La figure 2 ressemble à une hyperbole, la vitesse augmente avec [S]MR puis on a l’impression d’un phénomène de saturation. Afin de prouver qu’il s’agit bien d’une hyperbole et de pouvoir caractériser les sites enzymatiques, on trace le scatchard (Fig.3).
[pic 14][pic 15][pic 12][pic 13]
→[pic 16][pic 17]
→[pic 18][pic 19]
...