Spécificité des actions enzymatiques : les glucosidases.

TP : Spécificité des actions enzymatiques : les glycosidases

BUT

Le but de ce TP est de déterminer la structure d’un diholoside grâce à des enzymes qui ont une action spécifique et grâce à une réaction à liqueur de Fehling.

PRINCIPE

Action des enzymes

Les glycosidases vont couper la liaison osidique entre deux oses. Ces enzymes sont spécifiques, c'est-à-dire qu’elles hydrolysent les liaisons entre les oses spécifiques. En effet, le site actif de l’enzyme a une disposition spatiale spécifique et correspondante à la conformation de l’ose.

Chromatographie sur couche mince

La chromatographie sur couche mince est une technique de séparation des différents composants d’une solution. Ces composants sont séparés en fonction de leur affinité avec les différentes phases. La chromatographie se compose d’une plaque, la phase stationnaire sur laquelle on dépose le mélange à étudier et les différents témoins. Toutes ces molécules vont migrer en même temps que le solvant, la phase mobile, le long de la plaque. Cette migration s’effectue en fonction de l’affinité entre les molécules, la phase mobile et la phase stationnaire. Dans notre cas, la phase mobile étant apolaire et la phase stationnaire étant polaire, les molécules seront également séparées en fonction de leur polarité.

Ainsi, on mesure la référence frontale de chaque molécule. Cette valeur étant spécifique, on pourra alors identifier spécifiquement les molécules. Cette méthode est donc une méthode qualitative et non quantitative.

Réaction avec la liqueur de Fehling

[pic 1]

La liqueur de Fehling contient des ions cuivre qui vont précipiter en présence d’une molécule réductrice formant un précipité rouge brique. Cette réaction permet donc de mettre en évidence des sucres réducteurs dans la solution. En effet, les oses sont réducteurs lorsque leur fonction réductrice, le OH anomérique est libre dans le milieu. Si le diholoside réagit avec la liqueur de Fehling, on pourra en déduire que l’un des oses, ou les deux ne sont pas liés au niveau de leur OH anomérique.

RESULTATS

Chromatographie

Coller la chromatographie

Ainsi, dans les tubes n°1, 2 et 5, la digestion enzymatique n’a pas eu lieu. Au niveau de la tache formée par le mélange, on peut en déduire que la tache 1 correspond au galactose qui migre le moins, la tache 2 est caractéristique du glucose et enfin la tache 3 est formée par le fructose qui migre le plus loin.

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