Composition globale de la leptine humaine

1. Composition globale de la leptine humaine

La leptine est une hormone peptidique de 16kDa qui régule les réserves de graisses dans l’organisme.

5µL d’une solution de leptine, réduite et carboxymethylée (0,21 mg/mL) sont soumis à une hydrolyse acide totale. Le mélange d’acides aminés est traité par l’isothiocyanate de phényle. Les acides aminés sont séparés et quantifiés par HPLC (silice microgranulaire sur laquelle sont greffées des chaînes aliphatiques en C8). L’élution de la colonne est réalisée à l’aide d’un gradient eau/méthanol. Les résultats sont présentés dans le tableau suivant :

2. Séquence primaire de la leptine

La séquence est réalisée sur la protéine réduite et carboxymethylée.

a) Un séquençage automatique sur la protéine entière selon la méthode d’Edman a donné le résultat suivant :

VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDIS

b) Le traitement de la protéine par le bromure de cyanogène permet d’obtenir 4 peptides dont les séquences N-terminales réalisées sont :

PSRNVIQISNDLENLRDLL

DQTLAVYQQILTSM

LWQLDLSPGC

VPIQKVQDDTKTLIK

c) Le traitement par la chymotrypsine pendant un temps court conduit à l’obtention d’un mélange de peptides. Ces peptides sont séparés et séquencés complètement selon la méthode d’Edman. On a sélectionné 3 de ces peptides dont le séquençage a donné les résultats suivants :

SKSCHLPEASGLETLDSLGGVLEASGYSTE

QQILTSMPSRNVIQI

STEVVALSRLQGSLQDMLWQL

d) Le traitement par trypsine pendant un temps court conduit à l’obtention d’un mélange de peptides. Ces peptides sont séparés et séquencé selon la méthode d’Edman. On a sélectionné 3 de ces peptides dont les séquençages ont donné les résultats suivants :

VTGLDFIPGLHPILTLSKMDQT

DLLHVLAFSKSCHLPE

TIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLD

Les peptides résultant des coupures enzymatiques et chimiques sont purifiés par HPLC (chromatographie hydrophobe, colonne C18). Leur élution est réalisé à l’aide d’un gradient eau/acétonitrile en présence d’acide trifluoroacétique.

Déterminer la séquence primaire de la

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