Analyse par chromatographie sur couche mince de gel de silice

1. Extraction des lipides totaux

A partir d'un jaune d'oeuf séparé et placé dans un Becher de 250 mL, extraire sous agitation par

barreau magnétique par 100 mL de solvant TLPC (10 minutes). Travailler sous hotte chimique. Filtrer sur filtre papier.

Pour 5 mL de filtrat, ajouter 3 mL de solution aqueuse 0,1 % en NaCl. Récupérer la phase organique dans un nouveau récipient, déshydrater par ajout de Na2SO4 anhydre (éviter la formation d'agrégats de Na2SO4 sinon en rajouter). Filtrer, ajouter éventuellement 1 cristal d'antioxydant hydroquinone. Évaporer sous flux de diazote jusqu'à obtenir une masse jaune sèche.

2. Séparation phopholipides / lipides neutres

A un résidu sec lipides totaux préparé comme ci-dessus, ajouter 3 mL d'acétone et placer à 0-4°C

(bain de glace pilée). Les phospholipides précipitent dans l'acétone, les lipides neutres y sont solubles. Centrifuger. Récupérer le surnageant. Laver le culot avec 1 mL d'acétone froid. Centrifuger et

récupérer le précipité dans un tube de verre. Pour conservation, ajouter 1 cristal d'antioxydant hydroquinone et évaporer sous flux de diazote.

Le surnageant récupéré contient les lipides neutres. Pour conservation, ajouter 1 cristal d'antioxydant hydroquinone et évaporer sous flux de diazote.

analyschim/chromato/tp-ccm-jaunedoeuf.odt JF Perrin 1999/2014 Page 1/2

Egg yolk is a rich source of a variety of biochemically important compounds such as proteins and lipids (glycerides or fats, cholesterol, cholesterol esters, and phospholipids).

Egg lipids may be divided into two classes:

- Non-phosphorylated lipids : cholesterol (CS), cholesterol esters (CSE) ( components of cell membranes) and triglycerides (TAG) (fats, energetics reserves) ;

- Phospholipids (PL) (those containing a phosphate entity, with a very polar phosphate ester group). They are major structural components of cell membranes.

The yolk of one large egg (50 g total, 17 g yolk) contains approximately: 3.4 g neutral lipids, 1,5 g phopholipids, 2.8 g protein, 210 mg cholesterol (1/5 as cholesterol esters), 0.61 g carbohydrates,

In this experiment, the lipids will be isolated from egg yolks and separated into the two classes of lipids and these will be characterized through Thin Layer Chromatography.





3. Analyse par chromatographie sur couche mince de gel de silice

Deux Phases mobiles différentes seront utilisées : phase mob1 = heptane 60V/diethyl éther

40V/acide acétique 2V ; phase mob2 = TLPC. Toutes les manipulations en présence des solvants sont conduites sous hotte chimique.

Réactiver le gel de silice à l'étuve à 105°C pendant 30 minutes. Préparer une cuve de migration. Verser au fond de la cuve le solvant de migration, jusqu'à ce que le niveau du liquide dans la cuve atteigne 8 mm de hauteur. Refermer la cuve et attendre 30 minutes, pour que l'atmosphère de la cuve soit saturée (ceci

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