Dosage saccharose, fructose et glucose : KIT ENZYMATIQUE
Fiche de lecture : Dosage saccharose, fructose et glucose : KIT ENZYMATIQUE. Recherche parmi 300 000+ dissertationsPar Pauline Gautier • 29 Octobre 2019 • Fiche de lecture • 291 Mots (2 Pages) • 1 859 Vues
Dosage saccharose, fructose et glucose : KIT ENZYMATIQUE
De nombreuses techniques existent aujourd’hui pour doser les sucres :
- Méthode de LUFF-SCHOORL : cette méthode dose les sucres totaux et ne différencie pas glucose et fructose
- Test colorimétrique : il faut deux dosages pour obtenir les deux sucres distincts
- Chromatographie quantitative POURTALLIER : c’est la plus utilisé mais elle est très longue et délicate.
La méthode la plus adaptée est le dosage enzymatique.
La concentration en D glucose est déterminée avant et après l’hydrolyse du saccharose par beta fructosidase (invertase).
La concentration en D fructose est déterminée après la détermination du D glucose, après l’isomérisation par la phosphoglucose isomérase (PGI).
Détermination du D – glucose :
[pic 1]
[pic 2]
La quantité de NADPH formée est stœchiométrique avec la quantité de D glucose. Donc c’est le NADPH qui est mesuré par l’augmentation de l’absorbance à 340nm.
Détermination du D – fructose :
[pic 3]
[pic 4]
G6P réagit avec le NADP+ formant le gluconate 6 phosphate et le NADPH qui entraine une augmentation supplémentaire de l’absorbance stœchiométrique avec la quantité de D-fructose.
Hydrolyse du saccharose :
[pic 5]
La teneur en saccharose est calculée à partir de la différence de concentration en D glucose avant et après hydrolyse par la beta fructosidase.
Les grandes étapes de la manipulation :
- Les solutions de réactifs et suspensions sont préparés
- Dilution du miel par chauffage puis dissolution avec eau distillé
- 2 témoins sont préparés :
- Témoin de saccharose
- Témoin de D-glucose et D-fructose
- 2 échantillons sont préparés avec la solution de miel dilué :
- Échantillon de saccharose
- Échantillon de D-glucose et D-fructose
- Les absorbances sont lues au fur et à mesure de la préparation des échantillons
- Par calculs on détermine la concentration
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