Annale TPAB technique préparative analytique
Cours : Annale TPAB technique préparative analytique. Recherche parmi 300 000+ dissertationsPar aliya19 • 28 Février 2023 • Cours • 660 Mots (3 Pages) • 375 Vues
Licence Sciences et Technologies Mention Biochimie Techniques Préparatives et Analytiques en Biochimie
CC1 – 6 avril 2016 Partie « techniques chromatographiques » Répondre directement sur la copie
1) Les données suivantes ont été obtenues par chromatographie liquide sur une colonne remplie de 40 cm de haut. Un pic non retenu apparaît après 1,9 min. Rappel : loi de Purnell, RS=(√N/4).[(α-1)/α].[k/(k+1)].
[pic 1]
Composé | Temps de rétention (min) | W (s) | N | H (cm) | k | RS | α |
A | 10,0 | 45,6 | |||||
B | 10,9 | 49,2 | |||||
[pic 2]
a- Complétez le tableau. Définir brièvement chaque paramètre (signification et calcul).
- Quelle doit être la longueur de la colonne si son conditionnement reste le même ?
- Quel est, alors, le temps de rétention pour B sur la colonne ? |
- Quelles sont vos conclusions sur ce qui influence la résolution et comment ?
2) Un extrait préparé à partir de microsomes d’hépatocytes de rat renferme 4 protéines enzymatiques E1 à E4 dont les paramètres physico-chimiques sont les suivants (PM, poids moléculaire) : E1 : PM 250000 ; pHi 4,4 / E2 : PM 150000 ; pHi 4,7 / E3 : PM 80000 ; pHi 3,2 / E4 : PM 80000 ; pHi 7,6. Ce mélange, chromatographié sur une colonne de Sephadex G200 (limite d’exclusion 200000) en tampon pH 6, est fractionné en 3 pics de volumes d’élution croissants V1 (34,1 ml), V2 (39 ml) ,V3 (42 ml).
a- Expliquez à quoi correspondent les trois pics. Précisez le type de chromatographie utilisé.
b- Calculez le volume total de la colonne sachant que le Kav du composé 2 est égal à 0,32. |
c- Expliquez comment déterminer expérimentalement le volume total. |
A partir du pic 3, on réalise une chromatographie sur colonne de DEAE-cellulose, à pH 6. d- Précisez le type de chromatographie utilisé. Ecrivez la structure de la DEAE-cellulose. |
e- Indiquez les protéines retenues et celles non retenues dans la colonne. Expliquez pourquoi. |
f- Expliquez comment procéder pour récupérer les protéines retenues.
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