Metabolisme Ldh

Calcul de la vitesse initiale de réaction :

Pour calculer cette vitesse on doit calculer le coefficient directeur de la droite tangente à la courbe :

Nous prenons deux points éloignés sur la droite.

En abscisse, 20cm valent 1 DO et en ordonnée, 6cm valent 1 minute.

y2-y1=5cm donc 56=0,83min

x2-x1=5,6cm donc 5,620=0,28 DO y2-y1x2-x1=0,280,83=0,34 DO/min

Avec la loi de Beer Lambert, on peut déduire la concentration à partir de la DO :

DO = εlC <=> ΔDO = ΔεlC <=> ΔDO= εlΔC <=> ΔDOΔt = εlΔCΔt (Avec ε = 6,22.103 et l=1cm)

Donc : ΔCΔt = DOlεΔt = 0.346,22.103 = 5,47.10-5 M/min

vi=ΔnΔt = ΔcΔt*V (Avec V étant le volume de prise : ici égal à 25µL)

Donc : vi= 54,66.10-6*25.10-6  vi=1,37 nmol/min

Détermination des activités spécifiques et totales.

Pour calculer l’activité spécifique et l’activité totale, on a besoin de connaitre l’activité dans la cuve. Or Activitécuve = Vicuve* Vcuve (Avec Vcuve = 1mL)

Activitécuve = 1,37.10-3 µmol/min

L'activité spécifique d'un enzyme est la quantité de produit (en µmoles) formé par unité de temps par mg de protéine.

L’activité spécifique est égale à :

A.S.=Activitécuve quantité protéinescuve=1,37.10-3 0,0085=0,161 μmol.min-1.mg-1

L’activité totale est égale à :

Atot=Activitécuvevolume prise d'essai*Vfraction=1,37. 10-325*1,5.103=0,0822 µmol/min

2ème tracé : Fraction non retenue

La fraction non retenue est formée par les protéines contenues dans l’extrait qui n’ont pas d’affinité pour le ligand. Elles n’ont donc pas été retenues dans la colonne.

Grâce au tracé n°2, nous pouvons constater qu’il n’y a pas d’activité enzymatique : la courbe ne présente pas de variation. Sa pente est nulle.

Ceci est parfaitement logique étant donné le fait que la LDH est restée liée au bleu de Cibacron dans la colonne.

3ème tracé : Fraction de lavage

La fraction de lavage provient du tampon de rinçage utilisé pour éliminer les protéines qui n’ont pas d’affinité pour le ligand et qui sont restée coincées dans la colonne.

La pente de la courbe obtenue est également nulle. Cette fraction ne contient donc pas non plus de LDH. Comme précédemment, la LDH est restée liée au ligand.

4ème tracé : Fraction d’élution (E1)

E1 est obtenue après l’ajout d’un tampon d’élution contenant

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