La Chromatographie En Phase Gazeuse

La chromatographie en phase gazeuse

On l’utilise pour les molécules qui peuvent être volatilisées à de hautes températures et très classiquement pour les acides gras.

Colonne de chromatographie :

Il faut imaginer qu’on a pris la plaque de chromatgraphie sur couche mince et qu’on l’a roulée pour faire un tube.

La colonne de chromatographie en phase gazeuse est un tube dans lequel il y a de la silice (modifiée).

C’est exactement le même principe, c'est-à-dire que les lipides qui vont passer à travers la colonne vont soit avancés soit être freinés par la colonne.

Cette colonne fait plusieurs dizaines de mètres, c’est donc une spirale. Elle est également très fine, on l’appelle « capillaire ».

La colonne est située dans une enceinte qu’on va chauffer ( four) . On injecte l’échantillon en début de colonne ( étape équivalente à celle du dépôt de la chromatographie sur couche mince).

Pour l’extraction : On extrait les lipides d’un échantillon dans du chloroforme méthanol ( un grand volume généralement). Pour l’analyser il faut évaporer le chloroforme méthanol et reprendre les lipides d’abord dans un petit volume et dans un solvant qui nous intéresse en fonction de la méthode que l’on va utiliser.

Ici on a besoin de reprendre les lipides dans un solvant qui s’évapore facilement parce qu’ à travers la colonne passe en continu un gaz vecteur inerte ( comme hélium) qui représente la phase mobile.

On commence alors à chauffer (à très haute température), au fur et à mesure que l’on chauffe, on a certaines molécules qui passent à l’état vapeur. On utilise donc de préférence comme solvant l’hexane car il va être vaporisé en premier, il va partir (avant les molécules donc il ne gênera plus). Tout ce qui passe à l’état vapeur est poussé par le gaz vecteur vers la sortie de la colonne. Eventuellement elle peut intéragir avec la phase stationnaire, elle sera alors plus ou moins freinée. A moment donné, elle sortira de la colonne et passera devant le détecteur qui indiquera la sortie de cette molécule à tel temps.

On obtient alors un chromatogramme avec des pics très fins qui montrent les différents acides gras en fonction de la longueur de chaine et du nombre de double liaison.

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