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Dosage Glucose/Créatinine/Protéine TP rein

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Par   •  13 Mars 2022  •  Compte rendu  •  548 Mots (3 Pages)  •  1 039 Vues

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Préparation TP rein

1/ Dosage du glucose

  • Pour ce dosage, nous aurons besoin de 4 tubes de dilution, 3 tubes pour les 3 échantillons, 3 tubes pour diluer les urines et 1 tube pour le blanc, ce qui fait 11 tubes au total.

  • On utilisera 100 µL de solution standard ainsi que 8000 µL de réactif GOD.
  • Notre gamme de dilution sera composée de 4 tubes, contenant 10µL, 20µL, 30µL puis 40µL de solution standard, qu’on complète d’eau jusqu’à 50 µL.  

pipetage\ tube

1

2

3

4

concentration en solution standard

0.6 g/L

1.2 g/L

1.8 g/L

2.4 g/L

Vol. solution standard

10 µL

20 µL

30 µL

40 µL

H2O

40 µL

30 µL

20 µL

10 µL

Nous allons aussi diluer les urines au ½, comme nous en possédons environ 1 mL, il faudra mettre 500 µL d’une urine combiné à 500 µL d’H2O dans un tube, et faire pareil pour les 2 autres tubes d’urines .

  • - Commencer par préparer la gamme étalon.

- Préparer les solutions indiquées:

Blanc

étalon(tubes 1 à 4)

échantillons d’urine A,B et C

Eau distillée

10 µL

-

-

Dilution étalon

-

10 µL

-

échantillons

-

-

10 µL

Réactif GOD

1000 µL

1000 µL

1000 µL

  • Mélanger et laisser incuber 20 min à 20-25°C.
  • Lire l’absorbance à 500 nm contre le blanc réactif avant 60 min.

2/ Dosage des protéines

  • Pour le dosage des protéines, il faudra 5 tubes pour la courbe étalon, ainsi que 5 de plus comme on va transvaser 30 µL, ainsi que 3 tubes de plus pour les échantillons d’urine, ce qui fait 13 tubes en tout.

  • On utilisera 8000 µL de réactif Bradford ainsi que 300 µL de BSA.
  • Le kit doit être composé d’une gamme de 5 dilutions :

dilutions

1

2

3

4

5

concentration en BSA

0.28 mg/mL

0.56 mg/mL

0.84 mg/mL

1.12 mg/mL

1.4 mg/mL

Vol. de BSA

20 µL

40 µL

60 µL

80 µL

100 µL

eau distillée

80 µL

60 µL

40 µL

20 µL

0 µL

  • - Mélanger délicatement le réactif Bradford et l’amener à température ambiante.

- Réaliser la gamme étalon mentionnée plus tôt .

- Prélever 30 µL de la gamme étalon ainsi que des échantillons d’urines et les mettre dans de nouveaux tubes, auxquels on ajoute dans chaque tube 1 mL de réactif de Bradford (on obtient 8 tubes de 1.03 mL).

...

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