Dessalage du lait de vache par la technique de filtration sur gel.

Université du Québec à Montréal

Rapport de laboratoire #1 :

Dessalage du lait de vache par la technique de filtration sur gel.

Travail présenté a

Andrée Gravel

Dans le cadre du cour

Laboratoire de biochimie des macromolécules BCM1500:

 GROUPE 50/B

Expérience réalisée le :

21 Janvier 2022

Par

Manal Fikri

Rapport remis le :

28 Janvier 2022

Résume :

Dans cette expérience on va effectuer un dessellage avec la technique de filtration sur gel. Il s’agit d’une technique très efficace et rapide pour séparer les molécules selon leur taille et leur forme. Le but de cette expérience est de savoir quels sont les différents composants que contient la solution de lait qu’on va desseller et si elle contient ou pas des protéines et des sucres réducteurs en effectuant respectivement un Test de Biuret et un test de Benedict sur les solutions à analyser suite au dessalage, et pour confirmer cela , la solution de lait aura été soumise à une analyse par chromatogramme de conductivité et chromatogramme d’absorbance, pour sortir avec une conclusion de qu’est ce qui donne au lait sa couleur blanchâtre.

Introduction :

Le lait, produit de sécrétion animales sous forme liquide de couleur blanche opaque. On en retrouves plusieurs types qui diffèrent de composition selon le type de mammifère, de race, d’alimentation, d’environnement, d’âge, de saison ..etc

Le lait contient des éléments essentiels à la nutrition, c’est premièrement une excellente source de calcium qui est entreposée dans les os, donc il contribue à la formation des os et des dents en présence de vitamine D. C’est aussi une bonne source de protéines et de sucres, essentiellement le lactose. Il contient plusieurs vitamines et des minéraux, mais le composant principal du lait est : L’EAU. Il a plusieurs bienfaits sur la santé, il joue un rôle primordial dans la prévention contre plusieurs maladies comme les maladies cardiovasculaire, et certains types de cancers et protège contres des infections et participe au maintien d’une bonne flore intestinale, il favorise une meilleure tension artérielle et prévient contre l’ostéoporose.

 Le lait de vache plus précisément contient 87,5% d’eau. Il contient entre 3 et 5% de matières grasses, environs 3,3% de protéines et 5% de glucide, et plus précisément le Lactose ainsi que des minéraux.

La chromatographie par filtration sur gel ou chromatographie d'exclusion est une methode qui permet de séparer rapidement des différentes molécules dans des mélanges d'origine biologique qui sont souvent très sensibles à la dénaturation par rapport à leur taille et leur forme.

Elle comprend une phase mobile qui est un liquide (ou un gaz) et une phase stationnaire.

La matrice qui constitue la phase stationnaire est en forme de gel. Le type de gel est choisi en fonction du domaine de fractionnement dans lequel se trouves les composants à séparer.

Il existe plusieurs types de gel :

• Les gels hydratés : ce sont les plus utilisés, dont le Sephadex G10 a G200 de type dextran, et la sepharose qui est de type agarose.
• Les gels permanents : ce sont soit des minéraux ou des copolymères organiques.

Le type de gel est choisi en fonction du domaine de fractionnement dans lequel se trouvent les molécules à séparer

La phase stationnaire est constituée de bille de polysaccharides sphériques formant des granules de gel poreux.

Les grosses molécules qui ont un diamètre plus grand que celui des pores sont exclues et éluées en premier car ne traversent pas les pores.

Les petites molécules et moyennes molécules sont éluées ensuite car passent par les différents pores du gel, donc leur élution est retardée.

Dans l’expérience suivante, on va effectuer un dessalage de lait de vache par la technique de filtration sur gel pour séparer les différentes molécules qui se trouvent dans le lait comme les sels, les ions (Ca2+, Cl- ..), les petits peptides, les acides aminées, les vitamines, les lipides, les glucides…La filtration sur gel est une méthode idéale pour pouvoir effectuer le dessalage.

A la fin de l’expérience, après avoir collecter les 15 fraction de 0,5ml, elles vont subir 2 analyses quantitatives, une avec un chromatogramme de conductivité en a appliquant un champ électrique et analyser les molécules qui vont le dévier, ce sont celles qui vont être chargées, comme les ions ou les sels. La 2eme analyse et le chromatogramme. Les molécules qui absorbent a ce niveau d’absorbance sont : les acides aminées aromatiques tels que le tryptophane et la tyrosine. L'intensité du pic d'absorption à 280 nm (mAU) est proportionnelle à la teneur en protéines.

Résultats :

Tableau I : Le changement d’intensité de couleur Pour le test de Biuret et le test de Benedict pour chaque fraction

N.B.: les signes +, ++, +++ et ++++ indiquent l’intensité du changement de couleur + moins

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