TP Extraction des lipides de jaune d'oeuf

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SOMMAIRE

Table des matières

I.        BUT        

II.        PRINCIPE        

III.        RÉSULTATS ET INTERPRÉTATIONS        

1.    L’extraction par solvant d’extraction (solvant organique)        

2.     La séparation par CCM        

a)        CCM n°1        

b)        CCM n°2        

IV.        CONCLUSION        

V.        ANNEXES        

1.        Pour bien lires les tableaux de résultats des CCM        

2.        Chromatographies        

a)        CCM n°1        

b)        CCM n°2        

Table des tableaux

Tableau 1 : Volumes solvant de la CCM n°1        

Tableau 2 : Distances des tâches de la CCM n°1        

Tableau 3 : Résultats de la CCM n°1        

Tableau 4 : Volumes solvants de la CCM n°2        

Tableau 5 : Distance des tâches de la CCM n°2        

Tableau 6 : Résultats de la CCM n°2        

Table des figures

Figure 1 : Molécule de chloroforme        

Figure 2 : Molécule de méthanol        

Figure 3 : Molécule d'Hexane        

Figure 4 : Molécule d'éther diéthylique        

Figure 5 : Molécule d'acide acétique        

Figure 6 : Monoacylglycérol        

Figure 7 : 1,3 Diacylglycérol        

Figure 8 : 1,2 Diacylglycérol        

Figure 9 : Triacylglycérol        

Figure 10 : Molécule de cholestérol        

Figure 11 : Molécule d'ester de cholestérol        

Figure 12 : Molécule de dichlorométhane        

Figure 13 : Molécule d'eau        

Figure 14 : CCM N°1        

Figure 15 : CCM n°2        

1. BUT

Le TP réalisé aujourd’hui consiste à mettre en évidence les composants lipidiques du jaune d’œuf. Pour cela nous allons faire appel à deux principes simples: l’extraction et la séparation.

1. PRINCIPE

Comme nous venons de le voir, la réalisation de ce TP va reposer sur deux principales étapes et faisant appel à des techniques qui leurs sont propre.

Le jaune d’œuf est constitué d’un ensemble de molécules qui en font son unité. Or ici nous nous intéressons uniquement aux lipides, il est donc nécessaire avant tout d’isoler le contenu lipidique du reste : c’est le principe d’extraction. Ce dernier repose sur l’utilisation d’un solvant d‘extraction visant à séparer spécifiquement les lipides en faisant appel à une de leur propriété physique : leur solubilité dans les solvant organiques (contrairement aux glucides et protéines). Nous opérons donc une séparation par différence de solubilité entre les composants. C’est pour cela que le solvant utilisé sera un mélange dosé de chloroforme et de méthanol qui forme alors un solvant organique. Les lipides, et uniquement les lipides, vont se solubiliser dans le solvant tandis que les glucides et les protéines vont sédimenter dans le fond du tube. 

Une fois que les lipides sont obtenus, l’expérience n’est pas tout à fait finie puisqu’il faut maintenant mettre en évidence les différents lipides : c’est donc le principe de la séparation. Ce dernier repose sur l’utilisation de la chromatographie sur couche mince (CCM) ce qui nous permettra de séparer spécifiquement les divers lipides en faisant appel à une autre de leur propriété physique : l’hydrophobicité. En effet, la CCM est une technique qui permet de séparer des constituants par différence de migration en créant un champ de polarité au moyen de deux phases : la phase solide polaire (gel de silice) qui est le support de la migration, et la phase liquide plus ou moins apolaire qui est le vecteur de la migration. Dans ce cas on parle de chromatographie d’adsorption. Nous déposons donc les différents témoins et le surnageant liquide extrait du jaune d’œuf sur la plaque de silice, puis après migration et révélation par le bleu de Coomassie nous pouvons donc interpréter les résultats de l’expérience à l’aide des témoins. Les lipides du jaune d’œuf auront plus ou moins migrés selon leur polarité (plus le lipide sera polaire plus il aura tendance à être proche de la ligne de dépôt et plus le lipide sera apolaire, plus il aura tendance à se retrouver proche du front du solvant, voir à disparaître.) Nous pourrons les comparer aux témoins en utilisant les rapports frontaux (Rf). On rappel :

Rf = [pic 7]

où d est la distance ligne de dépôt/tâche et D est la distance ligne de dépôt/front du solvant.

1. RÉSULTATS ET INTERPRÉTATIONS

Maintenant que les bases de notre expérience sont posées, nous pouvons donc passer à la réalisation du TP.

Nous remarquons dans un premier temps que le jaune d’œuf utilisé est du jaune d’œuf lyophilisé. En effet, les lipides étant très peu solubles dans l’eau, il est plus facile de les extraire à partir d’un milieu anhydre. La qualité de notre première étape en sera meilleure.

1.    L’extraction par solvant d’extraction (solvant organique)

Nous préparons le solvant d’extraction chloroforme/méthanol avec le rapport (2 :1). Nous mettons donc deux fois plus de chloroforme que de méthanol. Une fois ces deux molécules en solution, elles constituent un solvant organique donc un solvant dans lequel les lipides sont solubles.

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