Compte Rendu de TP extraction des lipide du jaune d'oeuf

        Le but du TP "Lipides " est de caractériser la composition lipidique du jaune d'œuf. Pour cela nous avons effectuer trois manipulations successives. Tout d’abord nous avons extrait les lipides du jaune d’œuf en nous basant sur leur solubilisation spécifique puis nous avons effectué deux chromatographies (l’une étant plus polaire que l’autre) afin de pouvoir observer les différents constituants lipidiques grâce aux différentes affinités des substances par rapport à deux phases, l’une stationnaire et l’autre mobile.

Principe de l’extraction

        Le jaune d’œuf est composé de molécules diverses, des molécules solubles dans des solvants polaires et des molécules insolubles. Ces molécules hydrophobes sont les lipides, grâce à leurs propriétés, nous allons pouvoir séparer les lipides des molécules solubles dans un solvant composé de chloroforme et de méthanol (2:1), des molécules hydrophiles. Nous allons ainsi isoler les constituants lipidiques et récupérer après extraction le surnageant non soluble qui correspond à la phase lipidique.

Principe de la chromatographie sur couche mince (CCM)

        Il s’agit d’une méthode physique de séparation des constituants d’un mélange. Elle est basée sur la différence d’affinité des substances par rapport à deux phases, l’une stationnaire très polaire, une plaque de gel de silice et l’autre mobile composée d’un solvant ou d’un mélange de solvants. Cette méthode utilise le pouvoir adsorption.

        Sur la plaque, on place des dépôts des lipides témoins et du surnageant sur une ligne puis on plonge la plaque dans une cuve contenant le(s) solvant(s). La migration de la phase mobile se fait du bas vers le haut sur la phase fixe en entrainant les échantillons de la ligne de dépôt. Plus les espèces sont apolaires, plus elles sont entrainées par le solvant et plus elles migrent haut. Les espèces polaires sont elles retenues par le gel de silice.

        Ainsi on permet la décomposition des constituants selon les caractéristiques des substances qu’on va révéler par colorations spécifiques aux lipides. Suite à cela, on identifie les composants en calculant les rapports frontaux de chacun (rf = d / D, avec d : distance de la ligne de dépôt au constituants et D : distance de la ligne de dépôt au front du solvant, rf < 1) et en les comparant aux témoins.

Résultats et interprétations CCM1

Référence frontale :  Rf = d/D

Avec :         D = distance ligne des dépôts/front du solvant = 7,3 cm

                 d = distance ligne des dépôts/milieu de la tâche

Exemple pour l’acide gras : d = 3,8 donc rf = 3,3 / 7,3 = 0,45

        Nous constatons que le jaune d’œuf est constitué de triacylglycérol qui semble en majorité de par l’étendu des tâches des extraits de jaune d’œuf. Nous constatons également la présence de 1,3-diacylglycérol et de cholestérol même s’il semble un peu moins en contenir. Pour finir, en bien moindre mesure, semblent également être présents du 1,2-diacylglycérol et de l’ester de cholestérol. Pour les constituants les plus polaires, il est difficile de savoir lequel ou lesquels s’y trouvent.

        C’est pourquoi il est nécessaire de faire deux chromatographies puisque lors de la première, certains composés ne vont pas migrer. En effet, ils n'ont aucune affinité pour la phase mobile car ils sont trop polaires. Lors de la deuxième chromatographie, il faut utiliser une phase mobile légèrement polaire afin que les composés polaires aient une affinité avec celle-ci et puissent migrer. Il faut donc y ajouter de l'eau.

Résultats et interprétations CCM2

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