Compte rendu TP : EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D’ŒUF.

Compte rendu TP : EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D’ŒUF

1) BUT : 

Nous voulons séparer et caractériser les principaux constituants lipidiques du jaune d’œuf lyophilisé, pour cela nous réalisons une expérience en 2 étapes :

1. On extrait les lipides du jaune d’œuf grâce à un solvant organique.
2. Nous réalisons deux chromatographies sur couche mince (CCM).

Dans ce TP on se basera sur la propriété des lipides (composés hydrophobes) qui est d’être insolubles dans l’eau et solubles dans les solvants organiques.

Cette propriété nous permettra de séparer les composés du jaune d’œuf lyophilisé (séparer les lipides des autres composants tels que les protéines) et aussi de faire deux CCM pour identifier les lipides extraits à l’aide de solvants plus ou moins apolaires en comparaison avec des échantillons témoins.  

2) PRINCIPE :

EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D‘ŒUF :

Pour séparer les lipides du jaune d’œuf du reste des molécules composant ce dernier (protéines, glucides……), nous utilisons un solvant  organique relativement apolaire composé de chloroforme/méthanol (2 :1), (2 fois plus de chloroforme que de méthanol) et cela va permettre d’isoler les lipides qui sont hydrophobes et ont la particularité d’être solubles dans les solvants organiques ce qui est le contraire des autres composants qui sont non solubles dans ce solvant  et donc vont précipiter dans le tube à essai. On  prélève l’échantillon à partir du surnageant (les lipides sont dans le surnageant).

CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE :

La chromatographie est une technique de séparation composée de deux phases (phase mobile et phase stationnaire).Dans le cadre de notre TP, on a utilisé une chromatographie sur couche mince qui est une chromatographie d’adsorption (dans le cadre du TP car il y a d’autres types de CCM) composée d’une phase stationnaire (adsorbant solide : gel de silice qui est polaire) et d’une phase mobile (solvant ou mélange de solvants apolaires).Le principe de séparation est que le solvant va monter par capillarité le long de la plaque, quand le solvant arrive au niveau des dépôts des échantillons il les solubilise et les  entraine avec lui, la vitesse de migration des échantillons dépend des interactions avec la phase polaire (gel de silice) mais également des interactions avec le solvant. Les résultats dépendent des critères expérimentaux. La migration se fait avec des témoins « identification par comparaison à des échantillons témoins ».Chaque échantillon migre de bas en haut en parcourant une certaine distance (spécifique à l’échantillon), de ce fait on identifie les composants en calculant le rapport frontal (rétention frontale) car chaque tache correspond à un constituant qu’on identifie par comparaison de son Rf au Rf du témoin (l’échantillon et le témoin auront la même migration et donc le même Rf  dans des conditions opératoires identique si jamais ils sont similaires).On calcule le Rf grâce à la formule suivante :

 Rf= (hauteur de la  tache)/(hauteur du front du solvant)=(distance parcourue par l’échantillon)/(distance parcourue par le solvant)=d/D en cm

Les molécules sont séparées en fonction de leur polarité. Les molécules les plus polaires sont les plus retenues (affinité avec la phase stationnaire), les molécules les moins polaires sont entrainées par le solvant. Voilà pourquoi dans la 2eme CCM on utilise un solvant plus polaire pour pouvoir séparer les molécules polaires qui ont été retenu dans la 1ere CCM.

3) Résultats :

Dans les 2 CCM nous faisons 2 gros dépôts séparés d’extrait de jaune d’œuf pour augmenter les chances d’apparition des composés minoritaires et avoir un résultat plus précis. L’extrait de jaune d’œuf est dilué d’où la nécessité  de faire plusieurs petits dépôts dans un gros dépôt  (plus le dépôt est concentré moins on a besoin de mettre une grande quantité).

Dans les 2 CCM :

La phase stationnaire est une plaque de silice.

Dans la 1ere CCM :  

Phase mobile : solvant hydrophobe  apolaire composé d’hexane/diéthylique/acide acétique (70 :30 :1), celui-ci permet la migration des composés apolaires pour lesquels il aura de l’affinité.

Calculs des volumes des composés du solvant :

70+30+1=101

On divise 20 ml par 101 et on obtient 0.198 ml

_Hexane : 0,198*70=13,86

_Éther diéthylique : 0,198*30=5,94

_Acide acétique : 0,198*1=0,198

Ne pouvant pas être précis dans ces mesures alors on prend :

_Hexane : 14 ml                            _Éther diéthyique : 6 ml                              _Acide acétique : 0.2 ml

Nous avons effectué sur la phase stationnaire (plaque de silice) le dépôt de 13 échantillons  (11 témoins et 2 dépôts d’extrait de jaune d’œuf) qu’on mettra dans 20 ml du solvant de la phase mobile.

Les composés polaires restent sur la ligne de dépôt car ils ont peu d’affinité avec le solvant tandis que les composés apolaires sont entrainés par le solvant car ils ont une affinité avec ce dernier. Chaque composé entrainé par le solvant a une vitesse propre dépendant de ses caractéristiques et de celles des 2 phases (mobile et stationnaire).

À cause de probables erreurs de manipulation ou de conditions non appropriées  dans la 1ere chromatographie, Il n’y a pas de migration d’ester de cholestérol, ce dernier reste sur la ligne de dépôt.

TABLEAU RECAPULATIF

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