La détermination de la concentration de la caséine dans la bouteille de lait

Résumé

Nous voulions déterminer la concentration en caséine d'une bouteille de lait afin de la comparer aux valeurs indiquées sur la bouteille. Nous avons pour cela utilisé la méthode de précipitation au point isoélectrique. Ce qui nous a permis après un dosage d'obtenir les résultats suivant : Ccaséine =  9,02 g.L-1 alors que la concentration indiqué sur la bouteilles était de    .

Introduction

Le lait est un aliment important pour de nombreux êtres vivants du fait de sa richesse en protéine, lipides, glucides, vitamines et calcium.

Les protéines du lait sont majoritairement ( 80% ) des caséines. Dans le but de déterminer cette concentration en caséine nous l'avons séparé des autres constituants ( en effet isoler une protéine est fondamentale pour son étude ) afin de pouvoir procéder à un dosage.

Résultats – discussion

Chromatographie sur couche mince

Figure 1. Concentration en caséine et en tyrosine du lait en fonction du pourcentage d'acides

aminés libres.

[pic 1]

Figure 2a. Résultat de la chromatographie de différents acides aminés

Figure 2b. Composition en acide aminé des tri peptide[pic 2]

Au terme de la séparation des caséines des autres constituants du lait, une fois avoir peser le culot que nous avions obtenu, il nous a fallu calculer le rendement de notre préparation afin de faire une comparaison avec la composition du lait donnée sur la bouteille commerciale.

Cependant il arrive généralement, pour ne pas dire toujours, que le rendement ne soit pas optimale, c'est à dire de 100%. Il y a alors deux cas et qui peuvent chacun s'expliquer :

_soit le rendement est inférieur à 100% : ce qui signifie qu'il y aura pu avoir des pertes de matières durant la manipulation

_soit le rendement est supérieur à 100% : cela peut s'expliquer car dans ce cas il y a pu avoir de l'eau qui s'est rajoutée aux substances ou encore de la poussière, des éléments extérieurs.

Concernant la partie de la chromatographie sur couche mince, on s'intéresse de plus près au résultat obtenu sur les tâches qui sont ressorties après l'action du solvant, certaines d'entre elles se présentaient au même niveau, il nous était donc difficile de trancher sur tel ou tel acide aminé et de choisir l'exact. Il faudrait donc envisager une autre méthode pour obtenir une meilleure différenciation des acides aminés afin de pouvoir plus facilement juger de la présence des acides aminés formant les tripeptides.

Nous pouvons donc proposer une autre méthode qui serait sans doute plus approprié pour la séparation et l'identification des acides aminés : l'électrophorèse, qui permet le déplacement de molécule en fonction de leur charge sous l'action d'un champ électrique.Grâce à cette méthode les résultats pourraient être largement plus précis et donc concluant.

De part les résultats obtenus nous avons pu constater que la quantité de caséine n'était pas égale à celle qui était indiquée sur la bouteille de lait mais les résultats peuvent être différents selon l'exécution des manipulations et du suivi du protocole expérimental.

Les autres groupes ayant fait le même travaux obtiennent des résultats relativement différents.  

Conclusions

Au terme de ce travaux pratique nous avons pu approcher de plus près des techniques de manipulation spécifiques aux études concernant les peptides et donc aux protéines. Nous nous somme également intéressé aux acides aminés qui sont les bases constituant toutes protéines existantes.

On pourrait éventuellement pratiquer le même style d'expérience pour connaître d'autre composition sur d'autre substances, d'autres produits.

Matériels et méthodes

Extraction de la caséine :

        Afin de séparer la caséine des autres constituants nous avons utilisé la méthode de précipitation au point isoélectrique. Cette méthode consiste à faire varier le pH ( ici, on l'a abaissé ) afin de le mener au point isoélectrique de la caséine , point qui correspond au pH auquel cette molécule est électriquement neutre et donc, point auquel la solubilité de cette molécule est minimal ce qui favorise son agrégation.

Pour ce faire nous avons mélangé dans un bécher 20mL de lait écrémé mesuré à l'aide d'une éprouvette graduée et 5 mL d'acide acétique prélevé en utilisant une pipette jaugée.

L'acide a abaissé le pH du lait ce qui a crée un précipité dans le lait. On a ainsi obtenu ce que l'on nomme couramment du lait caillé.

 Ici l’aggloméra correspond aux caséines que l'on cherche à étudier. Après une première  centrifugation 10min à 4000tr/min et l'élimination du surnageant puis deux lavement, un à l’éthanol 70% et l'autre à l’éthanol 95% ( chacun suivit d'une centrifugation de 4 et 5 min à 4000tr/min ) nous avons laissé égoutter puis récupéré le précipité et fait sécher sur une feuille d'aluminium durant 24h. Après séchage nous avons pesé le culot et comparé le rendement de notre préparation aux indications fournies sur la bouteille de lait.

...