Compte rendu Biochimie caséine

Résumé

Le but de ce TP est de procéder à une séparation des caséines des autre constituants du lait grâce à la précipitation à leur point isoélectrique (3,7g de caséines), puis de manière générale, d'en connaître la concentration dans une solution grâce à un dosage colorimétrique, et finalement, de déterminer sa composition en acides aminés en opérant à une chromatographie.

Introduction

Le lait de vache est composé de nombreux éléments, tels que des glucides (le lactose), des lipides (acides gras saturés) et des protéines.

C'est à cet élément du lait que nous allons nous intéresser au cours de ce tp, et plus particulièrement aux caséines, représentant 80 % de la masse des protéines présentent dans le lait de vache.

A travers les méthodes employées, nous allons essayer de comprendre comment procéder à l'étude et à la manipulation des protéines en général à travers l'exemple de ces caséines, procédant à des expériences qui mettent en jeu l'application des connaissances acquises en cours.

Résultats

Lors de la première expérience, le lendemain après la pesée, on observe que le précipité, censé être composé uniquement de caséines, une fois séché, pèse environ 0,45g (à partir de 20ml de lait)

Sur la bouteille il est marqué que pour 100ml de lait, il y avait 3.2g de protéine. Comme la caséine compose 80% des protéines du lait, Il y a environ 2.56g de caséine pour 100ml

Pour 100ml, la caséine pesée fait 0.45g * 5 = 2,25g

Le rendement est donc de 2,25/2,56 = 0.80 donc 80%

Pour la seconde expérience, nous avons reporté les résultats sur ce tableau, A signifiant l'absorbance relative à chaque concentration en tyrosine.

[pic 1]

Les absorbances A pour les tubes 7 et 8 sont respectivement A= 0.38 et A= 0.69

On observe que pour 30 mg/L de tyrosine pur, on obtient une absorbance de 0.33. Si l'absorbance de la solution mère est de 0,38 alors sa concentration en tyrosine libre est de 0,03454 g/L.

Sachant que la concentration de tyrosine libre dans la solution ne représente que 40 % de la totalité des tyrosines de la solution d'hydrolysat.

La concentration réelle de tyrosine est de 0,1158 g/L

On sait que Cm = C*M

Donc C = Cm/M

C= 0,1158/181 = 6,3.10^-5mol/L

6,3.10^-5/3 = 2,1.10^-5mol/L

 La concentration molaire de caséines est de 2,1.10^-5mol/L.

Cm = C*M

donc Cm = 2,1.10^-5*25.10^-3 = 5,33 g/L.

La concentration massique des caséines est de 5,33 g/L.

La troisième expérience est une chromatographie.

Grâce à la chromatographie et aux Rf références, on a pu identifier les acides aminés constitutifs des deux tripeptides en notre possession.

Il s'agit, pour le MB2, de la leucine, de l'alanine ainsi que la proline.

Pour le MB3, il s'agit du tryptophane, de l'histidine et de la glycine.

[pic 2]

Les résultats obtenus lors de la première expérience nous ont fourni un résultat à titre informatif. De plus, on se rend compte qu'après vérification, les résultats sont conformes à nos attentes quant aux indications sur la bouteille de lait commerciale. Cela signifie que l'expérience a bien été effectuée.

Les résultats de la seconde expérience semblent cohérent entre eux et le rapport entre l'absorbance de chaque solution et leur concentration en tyrosine est proportionnel. Il en est de même pour la concentration massique des tyrosines ainsi que celle des caséines.

On peut aisément affirmer qu'il n'y a que peu d'erreurs de calcul, car l'on a pris en compte le fait que les tyrosines libre ne représentaient que 40 % des tyrosines présentent dans les solutions qui nous intéressaient.

Une erreur possible dans les résultats viendraient alors d'une mauvaise manipulation dans les dosages par exemple (ne pas changer de cône, se tromper de quantité à pipeter).

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