Techniques de chromatographie

Techniques de chromatographie

Définitions

Technique de chromatographie : séparation de molécules par partition entre deux phases, une phase stationnaire et une phase mobile. Technique de séparation au niveau moléculaire.

Il existe différents types de chromatographie :

Chromatographie analytique :

Qualitative : pour déterminer la présence d’un ou pls composés dans un mélange

Quantitative : pour quantifier, dosage, un ou pls composés dans un mélange

Chromatographie préparative : isoler un ou plusieurs composés d’un mélange pour ensuite l’analyser (cinétique enzymatique…)

Certaines chromatographies sont plus adaptées à de l’analytique et certaines plus adapter a du préparative.

Le soluté (molécule dans une solution) va pouvoir interagir :

Avec la phase stationnaire (immobile) par des phénomènes d’absorption ou de solubilisation, cela conduit à de la rétention (il sera retenu par la phase stationnaire).

Avec la phase mobile par des phénomènes de solubilisation ou il sera entrainé avec cette phase.

Les constituants de la phase mobile peuvent interagir avec ceux de la phase stationnaire

Ces phénomènes sont donnés à un instant donné.

Le phénomène d’équilibre entre phases stationnaire est dynamique 🡪 association/dissociation, à chaque instant on a une molécule d’un soluté qui passe de mobile à immobile est inversement.

Un même soluté X peut être présent en concentrations différentes dans les 2 phases à un instant t

Plus la concentration en soluté dans la phase stationnaire est grande, plus K va augmenter

Cela permet de calculer le coefficient de partage K qui dépend :

De la structure du soluté

De la nature de la phase stationnaire et de la phase mobile

De la température

Il faut donc choisir les phases stationnaires et mobile en fonction des différences de structure qui existent entre les solutés à séparer. En fonction de ces choix on effectuera différents types de chromatographie

Mise en œuvre de la chromatographie :

Il y a 3 façons de faire de la chromatographie :

Chromatographie en phase gazeuse (CPV ou GC), aujourd’hui on utilise plutôt GC)

Chromatographie sur couche mince (CCM ou TLC)

Chromatographie liquide

Chromatographie en colonne ouverte (pression du à l’atmosphère)

Chromatographie liquide haute pression HPLC

Chromatographie en phase gazeuse :

La phase stationnaire est constituée d’une colonne en matériau inerte de 0,1 à 0,32mm de diamètre

La paroi interne de la colonne est greffée chimiquement donnant un caractère plus ou moins polaire à la colonne

La phase mobile est un gaz inerte : gaz qui ne va pas interagir, chimiquement inerte, ne fait pas d’interaction avec les solutés 🡪 pas d’interaction avec la phase stationnaire, ni avec les solutés. Il permet d’entrainer les solutés

Domaines d’application : uniquement analytique pour des composés volatiles ou rendus volatiles

Constitué d’un four dans lequel il y a une colonne, un injecteur qui permet d’introduire les molécules qui va être entraîné par la phase mobile qui est un gaz inerte

Technique très majoritairement analytique (parfois quantitative)

Séparation selon la température de vaporisation des solutés (critère majoritaire)

Selon le type de phase stationnaire, séparation selon la polarité des solutés

Séparation uniquement des petites molécules (oses, acides gras, hydrocarbures…) (M<2000da)

Quand on injecte un petit volume d’échantillon avec l’injecteur

...