Epreuve écrire de Licence 2 de SV

Université Cheikh Anta Diop                                                Mai 2011

Faculté des Sciences et Techniques

Département de Biologie Végétale

D. Diouf

Epreuve écrite de Licence 2 de SV

Exercice 1 : Soit le fragment d’ADN (figure 1) dont seules les extrémités sont représentées d’une façon détaillée. La flèche grisée contient une séquence bornée par un ATG et un codon Stop, codant une protéine X. On veut digérer ce fragment afin de le cloner dans le plasmide pUC19 représenté sur la figure 2 mais on ne dispose que de deux enzymes de restriction BamHI et PvUII dont les sites de coupure (restriction) sont :

BamHI : 5’G/GATCC3’

PvUII : 5’CAG/CTG3’

La barre indique les nucléotides entre lesquels la coupure a lieu.

1. Indiquer l’enzyme capable de couper ce fragment (1 pt)
2. Représenter le fragment après coupure en indiquant l’orientation de chaque brin (2 pts)
3. Comment s’appellent les extrémités du fragment obtenu après digestion (2 pts)
4. Avec quelle enzyme faudra-t-il couper le plasmide pUC19 pour pouvoir cloner le fragment digéré dans le MCS (multiple cloning site ou polylinker) (1 pt)
5. On incube ce fragment et le pUC19 digérés ensemble dans un tube, quelle enzyme doit-on ajouter pour favoriser leur soudure (1 pt)
6. Si le clonage a réussi, le gène LacZ sera-t-il toujours fonctionnel (1 pt)

[pic 1]

Figure 1 : fragment d’ADN codant pour une protéine X

Figure 2 : carte du plasmide pUC19, lacZ code pour la β-galactosidase

Exercice 2: La séquence en figure 3 représente celle de la partie codante d’un gène d’hémoglobine de plante (filao ou Casuarina glauca). On veut amplifier par PCR la région allant de 100 à 460. Chaque amorce doit avoir une taille de 20 nucléotides.

a. Donner la séquence de chacune des amorces, son orientation et son pourcentage en GC (6 pts)

1 cgctaacaaa gtgagtgtgt gagcttgtga gagaaagaga taaagaaatg gctttgacag

61 agaggcaaga agctttgtta aaacaatcat gggaggtctt gaagcaaaac atccctgggc

121 atagtcttcg tctctttgcc ttgatcatag aagcagcacc agaatccaag tatgtgttct

181 cctttttgaa agactcgaat gaaattcctg aaaataatcc aaagctcaag gcccatgctg

241 cagtgatttt caagacaata tgtgagtcag ccactgagct gcggcaaaaa ggccaggccg

301 tgtgggataa taatactttg aagcgcttgg gttcaattca tcttaagaac aaaatcactg

361 atccacattt tgaggtgatg aaaggagcct tactaggaac aatcaaagag gcagttaaag

421 agaattggag tgatgagatg ggttgtgctt ggactgaagc ctacaaccag ctggttgcca

481 ccatcaaggc tgagatgaaa gaataagcct atcctatatc tttaaattga gatatttaaa

541 tatatgtgtg tacttttatg cacatttact tatatgtatt tgaggtatca acccacatca

601 tacactttca catacttcat gtttgtgatt tgtgtataaa gggtgtaatg cttacaaagg

661 ttctcctagt aggcaagtaa atttcccatc tataataaat aaattttttt attggggttg

721 taaaaaaaaa

Figure 3

Exercice 3 : Indiquer la ou les réponses justes

a. La RNAase est une enzyme capable de: (1 pt)

digérer des fragments ARN,

digérer des fragments ADN,

ligaturer des acides nucléiques

b. Les techniques de mutagénèse appliquées aux plantes permettent de: (1 pt)

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