Cours de chromatographie

SUITE TD CHROMATOGRAPHIE :

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Il faut étalonner :

• méthode de l’étalonnage externe (plus simple) : à partir d’une solution étalon du composé à analyser

Ex : doser la catéchine dans un thé (on connait la concentration donc la masse que l’on va injecter) on récupère l’air avec le chromatogramme. 1 pic = on veut quantifier un composé : avec le temps de rétention on sait retrouver le pic du composé à analyser

Pour chaque chromatogramme on écrit la relation
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K est identique car on est dans le même échantillon = même composé à identifier

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• Méthode de l’étalon externe

A partir d’une droite d’étalonnage : A=Ac+b

Ordonnée = Air du pic

Abscisse = concentration

Y=x donc la pente = K

B=0 (ordonnée à l’origine passe par 0) car on a une droite

Si les conditions chromatographiques ont bien été choisis on obtient bien une droite passant par l’orgine

• méthode de l’étalonnage interne :

Ajout d’une substance = étalon interne dans l’échantillon et dans la solution d’étalonnage

Composé à quantifiés + Etalon interne

Qd on ajoute une substance dans l’échantillon = étalonnage interne

• Technique qui permet de  s’affranchir de l’imprécision de l’injection
• -Le composé dois être pure et absent de l’échantillon à analyser
• Le temps de rétention dois être proche mais pas identique à ceux des autres composés (bonnes conditions chromatographiques
• Concentration de l’étalon interne proche de celles des composés à quantifiés
• Interne vis à vis des composés

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K est propre au composé

Il faut calculer un coefficient de réponse relatif K1/E

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Chromatographie d’exclusion stérique (CES)

Principe = on sépare les molécules par rapport à leur taille (volume qu’elles occupe) volume lié à leur taille c’est-à-dire à leur masse moléculaire

La phase stationnaire est composée de particules poreuses = il n’y a aucune rétention

Permet de sépare des molécules de type polymère

Protéines =Gélatine

Polysaccharides = amidon, pectine

Ce sont les plus grosse molécules qui sortent en premières : elles ne peuvent pas passer dans les pores,

Les petites passent par les pores, elles ont un chemin plus complexe donc sont retenues plus longtemps dans la colonne.

• Ex : on sépare des composants d’huile :

Les premiers grands pics = triglycérides

Deuxièmes = diglycérides

Troisièmes =monoglycérides

• Volumes d’une colonne de CES :

Volume de phase mobile passe entre les particule et dans le particule :

Volume de phase mobile interstitiel (Volume d’exclusion totale) = entre les particule

Volume de phase mobile entre les pores = Volume de pores

volume de perméation totale ?

VM=VI+VP

Les molécules grosses sortent à VI

Les molécules petites sortent à VM

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