TP détermination Du Volume Sanguin Chez Le Rat

Tp2 : DETERMINATION DU VOLUME SANGUIN CHEZ LE RAT

I/ INTRODUCTION :

Le but du Tp est de déterminer le volume de sang total d’un rat.

Pour cela il nous faut déterminer le volume plasmatique, et l’hématocrite, et on pourra en déduire le volume sanguin total.

Le volume plasmatique correspond à l’élément liquide du sang, dans lequel les cellules et les éléments figurés du sang sont en suspension

Il est trouvé grâce à une méthode de détermination indirecte : elle consiste à utiliser un traceur coloré, le Bleu Evans, dont on injecte une quantité connue dans la circulation sanguine du rat. En mesurant plus tard la concentration en BE dans le plasma, on pourra en déduire le volume plasmatique.

L’hématocrite correspond à la proportion d’éléments figurés dans le sang total. Il se mesure en pourcentage. Il est déterminé de manière simple en calculant le volume occupé par les éléments figurés du sang (majoritairement des globules rouges) divisé par le volume total.

II/ MATERIEL ET METHODE :

Tout d’abord, nous préparons le rat anesthésié sur une planche de contention, après l’avoir pesé.

On note le poids : 399g.

On met en place une canule dans la veine jugulaire qui va permettre l’injection du traceur dans la circulation sanguine :

Le traceur utilisé est le bleu Evans, car il doit être le plus inerte possible : il ne modifie pas le fonctionnement physiologique de l’animal, son pH est neutre, il ne modifie pas l’osmolarité du sang, il ne se diffuse pas hors du système circulatoire, il n’a aucune interaction avec les éléments figuré du sang, il ne s’accumule pas, et il n’est pas toxique.

On a d’abord déterminé la dose à injecter de bleu Evans. Sachant que la solution à injecter contient 0.025 % de bleu Evans, et que l’on doit injecter 0.05 mg de bleu Evans par 100 mg de poids vif ( avec le poids du rat = 399 g) on en déduit :

0.05 mg pour 100g de poids vif

X mg  pour 399g de poids vif

0.05 x 399 / 100 = 0.1995 mg de bleu Evans à injecter, soit 0.0001995 g.

Or on sait qu’il y a 0.025 g de bleu Evans dans 100 ml de solution mère à injecter.

Donc pour injecter 0.1995 g, on calcule : 0.0001995 x 100 / 0.025 = 0.798 ml de solution mère.

On injecte le bleu Evans et on patiente 5 min, car il faut attendre que sa dilution dans le sang soit uniforme, mais il faut recueillir le sang avant que ne commence l’élimination du bleu.

Parallèlement, on a mis en place un cathéter dans la carotide qui va permettre de recueillir le plus de sang possible dans un tube à hémolyse après l’injection du bleu.

• Détermination de l’hématocrite : après centrifugation du tube à hémolyse, on obtient 2 phases, le surnagent correspond au plasma et le culot correspond à la solution cellulaire du sang (contenant les éléments figurés).

H % = π x R2 x h / π x R2 x H H % = h/H

• Détermination du volume plasmatique : on mesure la DO du surnagent ( le plasma ) qui contient le bleu Evans injecté.

Pour cela, il nous a fallu tracer une courbe étalon de la DO du bleu Evans :

On prépare 5 solutions contenant du bleu Evans plus ou moins diluée avec du sérum physiologique :

(1) : concentration en Bleu Evans = 0.005 mg/ml

(2) : concentration en Bleu Evans = 0.010 mg/ml

(3) : concentration en Bleu Evans = 0.015 mg/ml

(4) : concentration en Bleue Evans = 0.020 mg/ml

(5) : concentration en Bleu Evans = 0.025 mg/ml

Premièrement, on détermine le λ max ( c’est-à-dire la longueur d’onde optimale pour mesurer l’absorbance du bleu Evans ) : on mesure l’absorbance de n’importe laquelle des solutions ci-dessus entre 500 et 600 nanomètres, tous les 10 nanomètres.

Finalement, l’absorbance maximale correspond à une longueur d’onde de 600 nanomètres. C’est donc avec cette longueur d’onde que nous utilisons pour réaliser la courbe étalon.

En mesurant la DO des solutions de bleu Evans,

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