Détermination Du Volume Sanguin Chez Le Rat

DÉTERMINATION DU VOLUME SANGUIN CHEZ LE RAT

INTRODUCTION

Dans le cadre des travaux pratiques de Physiologie Animale, nous avons utilisé une méthode

basée sur la dilution d’un traceur pour déterminer le volume sanguin chez le rat. Pour cela, nous

avons injecté une quantité connue de traceur dans la circulation sanguine.

Le sang est un tissu conjonctif fluide. Il se compose d’éléments solides, appelés éléments

figurés, qui sont dispersés dans un fluide, le plasma. Il circule dans l’ensemble de l’organisme.

Le plasma est constitué de 90% d’eau. Il est particulièrement riche en hormones et en

substances nutritives telles que les sels minéraux (sodium, chlore, fer, cuivre, zinc, iodures), les

acides aminés et les vitamines. Il contient également d'autres nutriments : des glucides (glucose),

des lipides (triglycérides, phospholipides, cholestérol,...), des protéines (albumine et

immunoglobulines). Les protéines participent au processus de la coagulation sanguine. Des

substances azotées comme l’urée (produit de dégradation des protéines), de l’acide urique (produit

de dégradation des nucléotides), de la bilirubine (produit de dégradation de l’hémoglobine) ou

encore de l’ammoniaque, sont aussi présentes.

Les éléments figurés regroupent différents types cellulaires : les érythrocytes, les leucocytes

(polynucléaires, monocytes, lymphocytes) et les thrombocytes. Ils ont tous pour origine les cellules

souches de la moelle osseuse. Chacun d’eux possèdent une fonction distincte. Les leucocytes sont

impliqués dans les défenses immunitaires de l’organisme. Les érythrocytes sont chargés du

transport de l’oxygène dans tout l’organisme ; pour ce faire ils contiennent une protéine,

l’hémoglobine, contenant un atome de fer qui donne sa couleur rouge au sang, qui fixe l’oxygène

afin de la transporter. Les thrombocytes sont chargés de débuter le phénomène de coagulation.

MATÉRIELS ET MÉTHODES

Préparation de l’animal

Le rat est anesthésié à l’uréthane à 5% par voie intrapéritonéale (2,5 ml pour 100g de poids vif).

Ensuite, l’animal est pesé afin de pouvoir déterminer la dose de Bleu Evans à injecter. Cela nous

permet aussi d’exprimer les volumes obtenus en pourcentage par rapport au poids de l’animal.

Choix du traceur

La molécule injectée doit répondre à plusieurs exigences. Elle ne doit pas être métabolisée par

l’organisme : on dit qu’il faut être inerte. Elle doit être non toxique. Elle doit être capable de se

répartir de manière homogène dans la circulation sans la quitter trop rapidement. Elle ne doit pas

être présente dans le compartiment liquidien.

Pour cette expérience, on choisit le Bleu Evans. Cette molécule est principalement retrouvée sous

forme liée à l’albumine du sang et ne quitte le compartiment sanguin que très lentement. Ce traceur

n’est pas capable de pénétrer dans les cellules sanguines. Ainsi il nous permet seulement de

déterminer le volume plasmatique.

Pose d’une canule dans la veine jugulaire

La canule nous permet d’injecter le traceur dans la circulation sanguine

Pose d’un cathéter dans l’artère carotide

Le cathéter nous permet d’effectuer un prélèvement sanguin.

Injection du Bleu Evans

A partir de la solution mère (0,025% de Bleu Evans), on doit préparer une dose à raison de 0,05 mg

de Bleu Evans pour 100g de poids vif. On dispose d’un rat de 305g. Il faut donc injecter 0,1525mg

de Bleu Evans, soit 0,61ml de solution mère. On injecte ensuite la quantité voulue dans la canule

posée au niveau de la veine jugulaire. Pour permettre à l’ensemble du Bleu Evans de rejoindre la

circulation, on chasse immédiatement après l’injection à l’aide de 0,5 ml de sérum physiologique.

Prélèvement sanguin

On réalise le prélèvement sanguin 3 minutes après le début de l’injection afin de laisser le temps au

Bleu Evans d’être réparti de manière homogène dans la circulation. La phase d’élimination de cette

substance commence 3 minutes après l’injection donc il est important de respecter le délai.

Pour effectuer le prélèvement, on coupe l’extrémité du cathéter, on laisse s’écouler les premières

gouttes et on recueille environ 3 ml de sang dans un tube à hémolyse.

Centrifugation du tube à hémolyse

Le tube est centrifugé 10 minutes à 4000 tours/minute. Cette étape permet de séparer les éléments

figurés du plasma. En effet, on obtient un surnageant qui correspond au plasma coloré en bleu par le

Bleu Evans et le culot qui regroupe l’ensemble des éléments figurés. Cette disposition nous

permettra de déterminer l’hématocrite. Cette dernière est notée H et correspond à la proportion

d’éléments figurés dans le sang total.

Mesures photocolorimétriques

...