TP Effet mutagène des UV sur la levure

TD - Effet mutagène des UV sur la levure

Salengros Aisam TGEN

Objectif : Vérifier expérimentalement si l’exposition aux UV augmente la fréquence des mutations de l’ADN

Stratégie : On met en culture sur un milieu nutritif en boîte de Pétri des cellules de la souche de levure ade2 qui forment normalement des colonies de couleur rouge. Juste après avoir été diluées et étalées, les cellules sont soumises à un rayonnement ultraviolet. Lorsque les colonies se seront développées, on étudiera leur couleur.

Document 1 : Voie de biosynthèse de l’adénine des levures blanches de souche sauvage :[pic 1]

[pic 2]

Les lévures ade2 sont rouges, elles possèdent une mutation dans le gène ade2 qui rend l’enzyme E6 inactive.

Document 2 : protocole

La mise en culture permet la multiplication des levures. Elle doit être réalisée en zone stérile afin de ne pas contaminer la boîte de Pétri avec d’autres micro-organismes présents dans l’environnement de la manipulation.

Manipulation en conditions stériles : [pic 3]

- Portez une blouse et des chaussures fermées.

- Si vous avez les cheveux longs, attachez-les.

- Lavez-vous très soigneusement les mains avec du savon, puis à l’alcool, puis laissez-les sécher à l’air libre.

- Nettoyez le plan de travail à l’eau de Javel ou à l’alcool.

- Allumez le bec électrique et laissez-le chauffer plusieurs minutes.  [pic 4]

Vous disposerez alors d’une zone stérile d’un rayon de 20 cm autour du bec dans laquelle vous devrez travailler.

Ensemencement des levures dans une boîte de Pétri contenant un milieu nutritif solide :

Dans la zone de stérilité créée autour du bec électrique :

- Marquez le nom des membres du binôme au feutre et le temps d’exposition (0, 15, 30, 60 ou 120 secondes) sur le coté de vos boîtes (et pas sur le couvercle, qui se retire !).

- Secouez le tube contenant les levures.

- Avec une pipette stérile, déposez 2 gouttes de suspension de levures au centre de la boîte.

- Avec l’étaleur stérile, les répartir délicatement sur toute la surface de la gélose.

Irradiation des levures

Attention : Les rayons UV, s’ils sont susceptibles de provoquer la mutation des levures, sont aussi dangereux pour vous : ne pas regarder la lampe, ni mettre ses mains à proximité lorsque la lampe est allumée.

- Placez les boîtes de Pétri sans leur couvercle sous la lampe UV pendant la durée d’exposition attribuée (0, 15, 30, 60 ou 120 secondes).

- Placez votre boîte à l’envers, à température ambiante pendant 1 semaine ou 4 jours à l’étuve à 28°.

Consigne :

- Réalisez le protocole.

- Expliquez l’apparition de colonies blanches sur vos boites de Pétri.

- Exploitez vos résultats pour vérifier si l’exposition aux UV augmente la fréquence des mutations de l’ADN.

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