Système crelox

enzyme cre : 38 KDa Catalyse la recombinaison entre deux site de reconnaissance,

les sites Lox. issue de bacteriophage P1 coupe une sequence adn entre deux sequence lox

site catalytique : arg 173 his 289 arg292 tyr324 tryp 315 , qui permet selon lorientation une

deletion, une inversion ou une translocation du gene cible

loxP / locus du crossover chez P1

34pb : 2 seq de 13pb symetrique avec entre une seq de 8pb, site de fixation de l'enzyme cre

la recombinase cre est donc utiliser pour effectuer une mutagènese dirigée

2 maniere d'inserer la recombinase cre dans une cellule :

-utilisation d'un virus pour introduire le gene cre dans la cellule

-generer des souris transgenique ou le gene de la recombinase cre est inserer apres un promoteur specifique :

ce promoteur pourra etre tissus spécifique ou promoteur inductible dans le temps , on injecte le vecteur d'expression de cre dans des embryons

ainsi en croisant une souris transgénique dont le gene cre a été inserer

sous le controle spécifique d'un tissus avec une souris dont le géné cible a été floxer ( insertion de lox par recombinaison homologue)

c'est a dire entouré par des sequence lox alors les souris issus du croisement presenteront

deux comprotement cellulaire different :

-dans le cerveau, le promoteur sera actif ainsi le gene de la recombinase sera transcrit et l'enzyme cre sera active

ainsi le gene floxer sera inactiver et la souris sera KO pour le gene cible du cerveau

-dans les autre cellules, le promoteur ne sera pas actif et le gene ne sera pas traduit donc le gene cible ne sera pas deleté

Le systeme crelox a donc permis une avancée en analyse génétique en effet l'analyse de l'effet de mutation constitutives :

ko de toute les cellules pour un gène , est limitée : mutation dans un géne donné entraîne une létalité, la fonction éventuelle

de ce gène ne peut être analysée au-delà du moment où intervient la létalité de plus dans le cas ou il n'y a pas létalité

l'analyse du phénotype engendré par la mutation qui produit ses effets en même temps dans tous les types cellulaires est difficile

Cette stratégie est d'une très grande puissance,car elle permet non seulement de contourner

le problème de létalité embryonnaire qui se produit lorsque toutes les cellules de l'embryon portent la mutation,

mais encore d'examiner l'effet de cette mutation en principe dans n'importe quel tissu,pourvu que l'on dispose

d'une

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