Mesure des volumes plasmatique et sanguin chez le rat

FONTANA Alexane                                                                               Le 22/01/2016

CHOINE Mélanie                                                                                           TP2

TP n°2 de Physiologie : Mesure des volumes plasmatique et sanguin chez le rat

I-Introduction :

Nous nous intéressons principalement sur le sang du rat lors de ce TP qui consiste à déterminer :

- la valeur de l’hématocrite du rat ; le volume occupé par les globules rouges circulants dans le sang exprimé en pourcentage par rapport au volume total du sang.  

- par méthode graphique, sa concentration plasmatique à partir du Bleu Evans ; colorant se fixant sur les protéines plasmatiques.

- enfin par spectrophotométrie, le volume sanguin du rat, à partir d’un seul prélèvement de sang.

II-Méthode et Matériel :

II.1-Méthode :

        Une fois le rat anesthésié, nous pesons le rat, et procédons à une canulation de la veine jugulaire à l’aide d’un cathéter hépariné. Une canulation consiste à percer la paroi d’un vaisseau à l’aide d’une aiguille afin d’y insérer un cathéter rempli d’une solution physiologique adaptée, ici de l'héparine. Avant ceci, nous ligaturons le haut de la jugulaire et nous préparons un nœud lâche en bas de celle-ci. Ce cathéter est ensuite maintenu à l’aide d'un nœud pour faire un prélèvement sanguin ou une injection de solution.

Par la suite, nous refaisons la même manipulation sur l'artère carotide excepté que cette fois-ci nous mettons un clamp sous le nœud lâche afin de ne pas provoquer d’hémorragie.

[pic 1]

        Concernant la veine jugulaire, nous introduisons 0.240 mL d’une solution de Bleu Evans (CBE= 500 g/L). Afin de pénétrer correctement le colorant, nous injectons 0.2 mL de sérum physiologique qui détermine le T0.

A partir de 5min, il nous faut prélever environ 5 mL de sang rapidement de manière à ce que nous évitons l’hémolyse. Le sang prélevé est déposé dans un tube à hémolyse contenant au préalable 0.1mLd’héparine.

Ainsi, nous remplissons le capillaire à l’hématocrite de sang et mettons à centrifuger pendant 5min.

Le reste de sang est centrifugé à 5000t/min pendant 20min, où nous prélevons par la suite le surnageant plasmatique pour notre dosage spectrophotométrique.

Dosage spectrophotométrique :

        Nous réalisons une gamme étalon à partir de 0, 10, 20 ,30 et 40 ɥL de solution A (1mL de Bleu Evans + 4mL de sérum physiologique) où chacun de ces tubes est complété par du sérum physiologique jusqu’à un volume de 2mL.

En revanche, notre essai comporte 0.1 ml de surnageant avec 1.9 mL de sérum physiologique, que nous mesurons à une longueur d’onde de 590nm.

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