Extraction de phospholipides

Introduction

Cette expérience visait à se familiariser avec les techniques d’extraction et de séparation des phospholipides utilisées en clinique et en recherche.

Tout d’abord, la technique d’extraction des phospholipides du jaune de l’œuf dépend de la solubilisation des lipides. Des lipides sont des molécules hydrophobes, donc ne sont pas soluble dans un solvant polaire. Cette propriété permet la séparation des molécules solubles et insolubles en solvants polaires. Le solvant utilisé est un mélange de chloroforme qui est apolaire et de méthanol qui est polaire (2 :1) et une solution saline agit comme surnageant. Le mélange de chloroforme et de méthanol est un solvant organique qui permet la solubilisation des phospholipides présents dans le jaune de l’œuf. De plus, Il y a précipitation des autres constituants du jaune de l’œuf ce qui forme un culot, car ils sont insolubles dans le solvant.

Ainsi, la technique de chromatographie sur couche mince est effectuée pour pouvoir faire la séparation des différents constituant du mélange de phospholipides récupéré du jaune de l’œuf. Cette technique dépend fortement sur l’affinité d’un composé pour la phase stationnaire et pour la phase mobile. La

Matériels et méthodes

L’expérience a été faite telle que décrite dans le manuel de laboratoire : Laboratoire de biochimie BICH 38721.

Résultats

La chromatographie sur couche mince est utilisée comme technique pour la séparation des phospholipides retrouvés dans le jaune de l’œuf. L’éluant utiliser lors de la chromatographie sur couche mince est un mélange polaire de chloroforme-éthanol-eau-triéthylamine (30 : 34 : 8 : 35). L’adsorbant utilisé est une plaque de gel de silice qui est polaire. Ainsi, la phosphatidyl choline, la phosphatidyl éthanolamine, la phosphatidyl inositol sont utilisés comme référence pour analyser les échantillons de l’inconnu D et des phospholipides du jaune de l’œuf. D’après les résultats recueillis, il est probable que l’inconnu D soit de la phosphatidyl choline et que les phospholipides présents dans le jaune d’œuf sont le phosphatidyl choline et le phosphatidyl inositol. Les résultats de la chromatographie sur couche mince peuvent être retrouvés dans le tableau 1 et la figure 1.

Tableau 1: Distances parcourues par les phospholipides et l’éluant, ainsi que le facteur de rétention des divers phospholipides lors de la chromatographie sur couche mince sur plaque de silice.

Phospholipides a (cm) b (cm) Rf

Phosphatidyl choline 1.2 7.9 0.15

Phosphatidyl éthanolamine 2.0 7.8 0.26

Phosphatidyl inositol 2.7 7.8 0.35

Phospholipide inconnu D 1.3 7.9 0.16

Phospholipides du jaune de l’oeuf 0.5 7.4 0.068

2.5 7.4 0.34

Figure 1 : Résultats expérimentaux de la chromatographie sur couche mince des phospholipides dans l’ordre qui procède : phosphatidyl choline, phosphatidyl

...