Etude de la croissance bactérienne

Compte rendu de TP n°3 :

Etude de la croissance bactérienne

Chez les micro-organismes unicellulaires, la croissance correspond à la multiplication des individus. L'étude de la croissance revient donc à évaluer l'augmentation de la population et s'effectue en analysant la courbe de croissance d'une culture microbienne. La notion de croissance bactérienne recouvre deux aspects : la croissance de la cellule bactérienne (taille, masse, volume), et le phénomène de division cellulaire (population). Pour simplifier, on assimile souvent la croissance à la division cellulaire. Le plus simple est de considérer la croissance comme un ensemble de réactions (du métabolisme) conduisant à la synthèse de biomasse bactérienne. La croissance est alors définie par l'augmentation de biomasse sèche.

1. Suivi de la croissance bactérienne par mesure de la densité optique :

Dans cette première partie, nous avons mesuré la densité optique de chaque cuve à spectrophotomètre à 600 nm contenant du milieu de culture prélevés à 20 minutes d’intervalle.

[pic 1]

[pic 2]

Nous pouvons donc constater que plus la durée de l’expérience augmente, plus la densité augmente également. Cette expérience est réalisée en phase de croissance exponentielle.

[pic 3]

[pic 4]

La pente de la courbe est de µ = 70,41 min-1 durant la phase exponentielle.

Nous pouvons donc déterminer le temps de génération (G) égale à Ln2 / µ .

G = Ln2 / 70,41 = 9,84.10-3 minutes. Cette valeur représente le  temps que met une bactérie mère pour se dédoubler en deux bactéries filles  ou temps nécessaire au doublement de la population.

1. Suivi de la croissance par dénombrement sur boîte de Pétri :

Afin de réaliser un suivi de croissance par dénombrement bactérien, nous avons réalisé deux dilutions à partir du premier et du dernier prélèvement au cours de la croissance d’E.Coli.

Une fois les deux dilutions réalisées, nous avons du déterminer un trouble bactérien.

Voici nos résultats pour la dilution numéro 1 à T0h  :

[pic 5]

Ici, nous pouvons constater que notre tube 106 correspond au tube numéro 3 en partant de la gauche sur la photo ci-dessus. Nous avons donc choisi les tubes numéros 6,7,8 pour réaliser l’ensemencement.

Voici nos 3 boîtes de Pétri contenant les dilutions 10-6 , 10-7, 10 -8 à T 0h :

[pic 6]

Voici nos résultats pour T0h, après 24h d’incubation à 37°C :

[pic 7][pic 8][pic 9]

Voici le nombre de colonies pour chacune des boîtes pour T0h :

Nombre de bactérie par mL : Ce nombre est obtenu en multipliant le nombre de bactéries par son facteur de dilution, puis à le diviser par le volume de l'inoculum.

(60x10-6)/1.10-3= 0,06 Bactérie/mL .

Nous avons ensuite réalisé, une deuxième dilution mais avec un prélèvement à T2h afin de déterminer un nouveau trouble bactérien.

Voici nos résultats pour la dilution numéro 1 à T2h  :

[pic 10]

Ici, nous pouvons constater que notre tube 106 correspond au tube numéro 3 en partant de la gauche sur la photo ci-dessus. Nous avons donc choisi les tubes numéros 6,7,8 pour réaliser l’ensemencement.

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