EXTRACTION DES LIPIDES DE JAUNE D'OEUF

1/ BUT du TP (5 points)

Ce TP a pour but dans un premier temps de séparer (l’extraction) les lipides puis de caractériser les composés lipidiques du jaune d’œuf lyophilisé. Afin d’y parvenir nous avons extrait les lipides de jaune d’œuf par un solvant organique pour les identifier à l’aide de deux chromatographies sur couche mince (CCM) en comparant les migrations obtenues à l’aide de témoin.

2/ PRINCIPE

Présenter le principe des 2 méthodes utilisées (10 points)

Au cours de ce TP nous avons utilisé deux méthodes :

-L’extraction des lipides du jaune d’œuf

-La caractérisation par CCM

L’extraction des lipides du jaune d’œuf :

Le jaune d’œuf n’est pas totalement composé de jaune d’œuf nous savons qu’il est composé aussi de glucides, de protéine etc…

Cela est la raison pour laquelle nous avons réalisé une extraction afin de sélectionner que les lipides du jaune d’œuf.

Nous savons que les lipides sont amphiphiles c’est-à-dire qu’elles possèdent un groupe hydrophile et un groupe hydrophobe ainsi on peut comprendre que ce sont des composants insolubles dans l’eau et soluble dans les solvants organiques apolaires.

En revanche, les autres composant du jaune d’œuf sont hydrophiles donc insolubles dans les solvants organiques.

Ainsi, ce sont par les caractères opposés des lipides et des autres composant trouvé dans le jaune d’œuf qui nous a permis de réaliser cette extraction.

Durant cette extraction, nous avons utilisé un solvant qui ne dénature pas les lipides afin de pouvoir mener cette étude de façon complète.

De plus le fait qu’on utilise un jaune d’œuf lyophilisé (ne contenant pas d’eau) apporte un avantage : Eviter les interactions polaires.

Pour réaliser cette extraction :

 Nous avons inséré 50 mg de jaune d’œuf lyophilisé dans un tube à essai, ensuite nous avons préparé un second tube à essai qui contenait le solvant polaire.

Pour cela, nous avons mélangé au Vortex (film que nous déposons à la surface du tube à essai) le méthanol/chloroforme (2 :1)

Nous avons pris 1mL de ce mélange pour le déposer dans le premier tube à essai, on a ensuite mélangé les deux composant toujours à l’aide du Vortex pendant 30 secondes.

Nous obtenons alors un tube à essai contenant deux phases ;

        -Le surnageant contenant les divers lipides

        -Un dépôt au fond du tube qui correspond aux autres composant du jaune d’œuf (glucides…)

Enfin, nous nous intéresserons à l’étude du surnageant par CCM

Méthode de chromatographie

Cette méthode est basée sur la différence d’affinités des différentes substances par rapport aux phases mobiles et stationnaires. C’est un principe qui repose sur le système d’absorption.

Elle a pour but de séparer divers composés chimiques d’un mélange grâce à leur différence de polarité. Plus les composés seront apolaires plus ils migreront car elles ne réagiront pas avec la phase stationnaire qui est-elle polaire. Donc si les composés sont polaires ils réagiront avec la phase stationnaire ce qui va leur permettre de moins migrer.

La phase fixe (stationnaire) est ici représentée par le gel de silice présentant en surface de nombreux groupement OH qui lui permettent une grande polarité et la phase mobile qui est le solvant.

Durant la première chromatographie nous avons déposés sur la plaque de silice différent témoins comme l’acide gras, le cholestérol etc. …

 Ensuite nous l’avons trempé dans un bocal contenant un solvant apolaire : le hexane/ether diéthylique /acide acétique (70 :30 :1) soit 14mL d’hexane, 6mL d’ether et 0,2mL d’acide acétique. On a par la suite refermé la cuve en attendant que la phase mobile migre jusqu’à 1cm du haut de la plaque de silice. La phase mobile migre par capillarité, elle a entrainé avec elle les différents constituant déposé sur la phase fixe.

Nous avons ensuite sorti la plaque de silice, noté le front de solvant qui nous permettra de calculer les références frontales des différentes tâches et enfin réaliser la coloration à l’aide du bleue de coomassie permettant la mise en évidence de ces taches, puis deux décolorations afin d’observer aux mieux les différentes migrations.

Cela nous a permis d’effectuer l’étude des CCM, en fonction de leur affinité avec chacune des phases.

Avec l’aide des différents témoins nous pourrons identifier les différents lipides présents dans le jaune d’œuf grâce au calcul du rapport frontal.

Cette chromatographie ne nous permet pas de trouver les lipides présents dans le jaune d’œuf car certains lipides ne vont pas migrer à cause de leur polarité trop élevée

La deuxième CCM est toujours le même principe or avec des préparations et des solvants diffèrent ; on utilisera 13mL de dichlorométhane 5mL de méthanol et 0,6mL d’eau.

3/ RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION

Légender clairement les chromatogrammes et ne pas oublier de les joindre au compte rendu (les coller, les agrafer ou les mettre dans une pochette fermée avec le compte-rendu) (5 points). 

Calculer les références frontales de tous les produits déposés sur la plaque chromatographique

N°1 (CCM1) et rendre les résultats sous forme d’un tableau clair (5 points).

Sur notre CCM1 on peut observer la phosphatidylcholine donc en déduire une bonne séparation, a l’inverse une absence de phosphatidylethanolamine donc on peut supposer qu’il est instable.

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