Caractérisation des fonctions cétone et aldéhyde par identification des groupements carbonyles

1. But du TP :

- L’identification et la mise en évidence des groupements fonctionnels carbonyles des sucres (fonctions aldéhyde et cétone).

-  La compréhension de la spécificité des  tests de Molisch, Fehling, Bial, Seliwanoff et Tollens.

- L’identification d’une substance glucidique inconnue.

2. Principe du TP :

Dans ce TP, plusieurs tests ont été effectués afin de pouvoir caractériser des groupements fonctionnels carbonyles de certains sucres.

- Les tests de Molisch, Seliwanoff et Bial ont le même principe ; une réaction de déshydratation des sucres (5 oses ou plus) en présence d’acide fort qui se transforment en des dérivés furfuraliques, qui vont à leur tour se condenser avec l’ α-naphtol pour donner un composé coloré.

-Les tests de Fehling et Tollens ont le même principe ; des réactions d’oxydoréduction devraient avoir lieu en présence d’un aldéhyde pour le test de Tollens ou d’un sucre réducteur pour le test de Fehling. Pour le test de Tollens, les aldéhydes qui ont un pouvoir réducteur meilleur que celui des cétones vont réduire le (NH3)2 en agent métallique, formant une fine couche brillante d’argent à la surface interne d’un tube à essai. Pour le test de Fehling, en présence d’un sucre réducteur, le cuivre présent dans la liqueur de Fehling subit une réduction en oxyde cuivreux de couleur rouge brique.

3. Mode opératoire :

3.1. Matériel utilisé :

- Solution de glucose, fructose, galactose, lactose (de concentration connue de 2%)

- Liqueur de Molisch

- Liqueur de Fehling (A+B)

- Réactif de Tollens

- Réactif de Seliwanoff

- Réactif de Bial

- Acide sulfurique (H2SO4)

- Pipettes jaugées de 1 et 2ml

- Micropipette 1000 µl

- Tubes à essai avec portoir

- Bain marie

3.2. Le protocole expérimental :

3.2.1. Test de Molisch :         

1- Mettre 2ml de solution de sucre dans des tubes à essai différents, prélevés à l’aide d’une micropipette

2- Rajouter trois gouttes du réactif de Molisch dans chaque tube

3- Rajouter délicatement 2ml d’acide sulfurique (H2SO4), sous la hotte

4- Faire une observation.

3.2.2. Test à la liqueur de Fehling (réactif de Bénedict) :

1- Mettre 2ml d’un mélange équivolumique de la liqueur de Fehling A et B dans des tubes à essai différents

2- Rajouter 1ml de sucre dans chaque tube, prélevé à l’aide d’une micropipette

3- Chauffer dans un bain-marie bouillant

4- Faire une observation après 3min.

3.2.3. Test de Tollens (le miroir d’argent) :

1- Mettre 3ml de réactif de Tollens dans des tubes à essai différents (sous la hotte)

2- Rajouter 1ml de sucre dans chaque tube, prélevé à l’aide d’une micropipette

3- Incuber pendant 5 à 8min à température ambiante

4- Faire une observation

5- Faire une nouvelle observation 15min après, notez s’il y a des changements et expliquez, le cas échéant, votre observation.

3.2.4. Test de Seliwanoff :

1- Mettre 2ml de réactif de Seliwanoff dans des tubes à essai différents

2- Rajouter 1ml de sucre dans chaque tube, prélevé à l’aide d’une micropipette

3- Chauffer dans un bain-marie bouillant

4- Faites votre observation après refroidissement.

3.2.5. Test de Bial :

1- Mettre 2ml de réactif de Bial dans des tubes à essai différents

2- Rajouter 2ml de sucre dans chaque tube, prélevé à l’aide d’une micropipette 

3- Chauffer dans un bain-marie bouillant

4- Faites votre observation après refroidissement.        

3.2.6. La solution X : 

1- Mettre 1ml de la solution X dans chaque tube, prélevée à l’aide d’une micropipette

2- Ajouter dans chaque tube un réactif/ liqueur différente (le même protocole expérimental et dans les mêmes conditions de chaque test)

3- Identifier le diholoside contenu dans la solution X

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4. Résultats :

4.1. Test de Molisch :         

Un anneau violacé (réaction positive) avec l’ensemble des sucres testés

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Figure 1: Test de Molisch

4.2. Test de Fehling :         

Un précipité rouge brique (réaction positive) avec l’ensemble des sucres testés

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