Biochimie microbienne

TP N° 1 :

ISOLEMENT ET PURIFICATION D’ENTEROBACTEIRES A PARTIR D’UN ECHANTILLON DE SOL

• Objectif :

• Réalisation d’un isolement et purification d’entérobactéries à partir d’un échantillon des suspensions-diluées du sol forestier et agricole puis faire des différentes méthodes d’ensemencement des microorganismes.
• Faire un  dénombrement de la flore bactérienne non exigeante et des entérobactéries, et comparer entre les deux échantillons.
• Identifier  la morphologie macroscopique «  caractères culturaux des différentes colonies observées sur les milieux EMB et GN, et leurs mobilités ».

• Principe :

• L’isolement est réalisé à partir d’un échantillon des suspensions-dilutions puis ensemencer ces dernières sur des milieux de culture solide :milieu EMB et GN.
• Les germes contenus dans le sol seront développés et multiplier pour former des colonies, le dénombrement  de ces colonies permet d’estimer la quantité de germes contenue dans le sol étudier.
• L’utilisation d’un milieu sélectif comme le milieu EMB permet le criblage des bactéries à gram négatif (entérobactéries) présentes dans l’échantillon de sol ainsi l’identification de la taille, l’aspect, la couleur, texture, de ces entérobactéries à la fin de déterminer leurs  genre probable.    

• Résultats :

        SOL AGRICOLE[pic 1]

        SOL FORESTIER[pic 2]

Définition des milieux qu’on a utilisé dans ce TP :

GN : En biologie, la gélose nutritive ou gélose nutritive ordinaire (GNO) ou encore gélose ordinaire est un milieu d'isolement non-sélectif.

L'isolement est réalisé dans le but de contrôler la pureté d'une souche bactérienne (pur s'il y a un type de colonie sur la gélose) ou de purifier la souche bactérienne si elle est contaminée.

L'isolement permet de séparer des micro-organismes différents dans un mélange qui pourront être ainsi étudiés individuellement.

GELOSE EMB :préconisée originellement par levine,est utilisée pour isoler et identifier E.coli et Enterobacter, ainsi que les bactéries intestinales à Gram négatif dans les produits pharmaceutiques, les produits laitiers et les autres produits alimentaires.elle est également employée pour le contrôle des eaux comme milieu d’isolement et d’identification après culture en milieu liquide(test présomptif).

Sur cette gélose nutritive on observe le nombre de colonies différentes (nombre de type de colonies) et on fait une description des colonies isolées.

• Dénombrement de la flore bactérienne non exigeante et des entérobactéries, et comparaison entre les deux échantillons :

1-1-pour le sol agricole :

On prend la dilution 10-1 car la moyenne  de nombre de colonies est compris entre

30 et 300

-Milieu GN :

 La moyenne de nombre de bactérie présent dans la dilution 10-1=61.5 et c’est le plus proche de 300

-61.5*10=615 ufc/ml

-615*10=6150 ufc/ml dans 1 ml de la solution mère

-6150*50=307500 dans la solution mère complète

307500/4.952=62096.12278 ufc/g

Milieu EMB :

 La moyenne de  nombre de bactérie présent dans la dilution 10-1=6.5 et c’est le plus proche de 300

6.5*10=65 ufc/ml

65*10=650 ufc/ml dans 1 ml de la solution mère

650*50=32500 dans la solution mère complète

32500/4.952=6563.004847 ufc/g

1-2-pour le sol forestier :

On prend la dilution 10-1 car la moyenne  de nombre de colonies est compris entre 30 et 300

Milieu GN :

La moyenne de nombre de bactérie présent dans la dilution 10-1= 190.33  et c’est le plus proche de 300

190.33*10=1903.3 ufc/ml

1903.3*10=19033 ufc/ml dans 1 ml de la solution mère

19033*50=951650 dans la solution mère complète

951650/4.62=205984.8485 ufc/g

Milieu EMB

La moyenne de nombre de bactérie présent dans la dilution 10-1= 138.75 et c’est le plus proche de 300

138.75*10=1387.5 ufc/ml

1387.5*10=13875 ufc/ml dans 1 ml de la solution mère

13875*50=693750 dans la solution mère complète

693750/4.62=150162.3377 ufc/g

2-pour le pourcentage des entérobactérie par rapport à toute la flore bactérienne :

Milieu GN =100%

Milieu EMB=X

62096.12278=100%

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