BCG, Bradford, Lowry et A280 : des méthodes spécifiques de dosage de protéines

BCG, Bradford, Lowry et A280 : des méthodes spécifiquesde dosage de protéines

Résumé 

Plusieurs méthodes en laboratoire sont utilisées afin d’effectuer un dosage des protéines permettant d’évaluer les protéines mis en évidence par plusieurs méthodes. Ce laboratoire vise à déterminer à partir de différentes méthodes, absorbance à 280 nm, la méthode de Lowry, la méthode de Bradford et la méthode de BCG, la concentration d’albumine dans un sérum (protéines sanguines) et dans sept échantillons à partir de courbes standards, selon différentes spécificités et affinités. Les courbes standards ont été réalisées à partir des dilutions comprenant toutes des concentrations d’albumine sérique bovine. À partir des équations des courbes standards, il a été possible de déterminer la concentration d’albumine se trouvant dans chaque échantillon et ainsi comparer les résultats avec les valeurs théoriques. Ceci permet de déterminer quelle méthode est la plus fiable. La méthode de BCG sera celle la plus fiable pour doser de l’albumine avec 44,64 mg/ml pour le sérum de bœuf non dilué. Toutefois, pour les autres méthodes de test de protéines totales, les valeurs varient plus ou moins selon les molécules que le test met en évidence. Par exemple, pour l’échantillon de sérum de bœuf dilué, les valeurs de concentration sont respectivement de 63,26; 78,83 et 78,49 mg/ml. Ainsi, il est possible d’affirmer que selon les protéines devant être mis en évidence et la spécificité d’une méthode, le choix du test sera différent.

Résultats

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Figure 1. Courbe standard afin de déterminer la concentration d’albumine par le BCG.  Afin de réaliser un dosage, cinq standards ont été réalisés à partir d’une solution fraîche d’albumine sérique bovine (100 µg/ml) dans de l’eau distillée. Une lecture de leur absorbance a été faite à 635 nm permettant de trouver les concentrations finales d’albumine dans le sérum de bœuf non dilué et dilué (1:1).

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Figure 2. Courbe standard de la méthode d’absorbance à 280 nm pour le dosage des protéines.Le dosage des protéines par la méthode d’absorbance à 280 nm a été réalisé à partir de sept standards préparés avec une solution de BSA (1000 µg/ml) dans de l’eau distillée. La lecture de l’absorbance des standards ainsi que des échantillons (1 à 7) a été réalisée sur une microplaque de quartz à 280 nm. Cette technique permet d’évaluer la quantité des protéines ayant des composés aromatiques (tyrosine et tryptophane) pour les sept échantillons. La donnée pour le standard ayant une concentration de 50 µg/ml a été retirée pour conserver la linéarité.

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Figure 3. Courbe standard de la méthode de Lowry à une longueur d’onde de 750 nm pour le dosage des protéines. Le dosage des protéines par la méthode de Lowry à une longueur d’onde de 750 nm a été réalisé à partir de sept standards préparés avec une solution de BSA (1000 µg/ml) dans de l’eau distillée. Cette méthode permet d’évaluer la quantité de protéines en fonction des liens peptidiques et des groupements phénols (tyrosine).La lecture de l’absorbance des standards ainsi que des échantillons (1 à 7) a été réalisée.

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Figure 4. Courbe standard de la méthode de Bradford à une longueur d’onde de 595 nm pour le dosage des protéines. Le dosage des protéines par la méthode de Bradford à une longueur d’onde de 595 nm a été réalisé à partir de sept standards préparés avec une solution de BSA (1000 µg/ml) dans de l’eau distillée. Cette méthode permet d’évaluer les protéines en fonction de leur fixation au colorant par rapport à leur structure primaire. La lecture de l’absorbance des standards ainsi que des échantillons (1 à 7) a été réalisée. La donnée pour le standard ayant une concentration de 500 µg/ml a été retirée pour conserver la linéarité.

Tableau I. Concentrations de chaque échantillon (1 à 7) déterminées à partir des courbes standards pour chacune des méthodes, absorbance à 280 nm, méthode de Lowry et méthode de Bradford pour le dosage des protéines.

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