Extraction D'ARN

Compte rendu de Tp méthodes d'investigation en génie biologique

EXTRACTION D'ARN

Introduction

L'ARN est une molécule biologique constituée d'un enchainement d'acides nucléiques. Elle contient tout ce qui est codant et informatif de la protéine. Cette molécule est très utilisée dans les études génétiques et les recherches biotechnologiques.Pour l'étudier on doit l'isoler des cellules ou des tissus .Cette technique s'appelle l'extraction de l'ARN. Dans notre Tp le protocole vise à extraire l'ARN totaux(ARNm+ARNr+ARNt) des morceaux de cerveau de rat pour les quantifier et évaluer leur pureté.

Materials and Methods

Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate - phenol-chloroform extraction:

We use it for isolating total RNA from biological samples

like piece of rat brain . The principle of the method is that

RNA is separated from DNA and proteins after extraction

with an acidic solution containing guanidinium thiocyanate,

sodium acetate,phenol. it is called tri reagent and

homogenize with a blue plunger in ice.

After that we add chloroform, followed by centrifugation.Total

RNA remains in the upper aqueous phase, while most of

DNA and proteins remain either in the interphase or in the lower organic phase. Total RNA is then recovered by precipitation with isopropanol and can be used for several applications.

spectrophotometry method:RNA quantification is performed by the optical pickup with a spectrophotometer.

Résultats

• Lors de préparation de tissu

Après l'ajout de tri-REAGENT au tissu on a vortexé et en résultat on a obtenu un mélange homogène dont y'a plus de morceau de cerveau.

• Lors de l'ajout de chloroforme:

Le chloroforme est dense et favorise une séparation

de phases. Il a coulé tout au fond de tube et on a

observé un changement de de couleur de la

solution (rose) et quand on a vortexé le chloroforme

s'est déplacé pour s'attacher aux protéines et à

l'ADN et là on a observé 3 phases :

• Lors de l' ajoute de l’isopropanol

On obtient un culot blanc contenant l’ARN que l’on met dans de l’eau RNase free.

On le stocke

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