Expériences de base en microbiologie

Groupe 8C

Compte-rendu TP microbiologie

Introduction

La microbiologie s’intéresse à l’étude des microorganismes. Elle comporte 7 branches : bactériologie, mycologie, parasitologie, immunologie, virologie, génétique et la biotechnologie Une connaissance approfondie de la physiologie des microorganismes, de leur génétique et des interactions entre eux facilite notre compréhension du monde vivant à l’échelle microscopique. La microbiologie intervient dans les domaines de la médecine et santé publique (étude des maladies infectieuses), thérapie (recherche de nouveaux traitements), biologie (connaitre les microorganismes et nous renseigne sur l’évolution des espèces et la diversité biologique). On l’utilise aussi dans l’industrie alimentaire et l’hygiène afin d’améliorer la sécurité alimentaire. La microbiologie intervient aussi dans l’écologie et l’environnement, l’industrie et l’énergie.

Macération d’herbe

Il est nécessaire de travailler en milieu stérile pour éviter toute autre contamination

        Un état frais est une observation de bactéries vivantes (entre lame et lamelle au MO) qui permet de distinguer leur forme et d’observer leur mobilité.

        Nous avons réalisé un état frais d’une macération d’herbe : cela nous a permis d’observer la diversité des microorganismes qu’il y avait (eucaryotes et procaryotes) dont certains sont mobiles.

Étude d’un mélange bactérien

        Nous avons étudié le tube n°5.

        Nous avons réalisé un état frais de ce tube après stérilisation (javel, stérilisation de la lame dans la flamme). Nous avons observé des coques immobiles et des bacilles mobiles. Ces derniers avaient des mouvements rectilignes ou de culbutes (tourne sur lui-même).

[pic 1]

        Puis nous avons réalisé une coloration de Gram. Cette coloration permet de classer les bactéries que l’on observe en deux groupes : Gram+ ou Gram-. Ces deux groupes diffèrent par la constitution de la paroi bactérienne : les Gram+ ont une couche épaisse de peptidoglycane tandis que la paroi des Gram- est constituée d’une fine couche de peptidoglycane et d’une membrane externe. Suite à cette coloration, les bactéries Gram+ seront colorées en violet et les bactéries Gram- seront colorées en rose.

[pic 2]

        Commentaire : suite à cette coloration, nous pouvons remarquer que le tube n°5 est composé de bacilles Gram- (car colorés en rose) et de coques Gram+ (car colorées en violet). On distingue les bacilles et les coques par leurs formes : les bacilles ont une forme de bâtonnets et les coques ont une forme sphérique.

        Après isolement sur différents milieux gélosés, on a pu en déduire différentes caractéristiques des microorganismes de notre tube :

        GNO (Gélose Nutritive Ordinaire) : c’est un milieu non sélectif. Toutes les bactéries de notre tube ont donc pu pousser (formation de colonies sachant qu’une colonie est à l’origine d’une seule bactérie). Après observation de la boite de Pétri, on voit deux sortes de colonies différentes :

Tableau comparatif des différentes colonies issues du tube n°5 après isolement sur GNO

        Il existe également des milieux sélectifs : Chapman, EMB, D.Coccosel. Le milieu EMB sélectionne les Gram- tandis que les milieux Chapman et D.Coccosel sélectionnent les Gram+.

        Chapman : ce milieu sélectionne les bactéries halophiles Gram+ et nous indique si elles savent utiliser le mannitol comme sucre.

Résultats : nous observons des colonies de coques, on en déduit donc qu’elles sont halophiles. Cependant elles ne savent pas utiliser le mannitol car le rouge de phénol du milieu reste rouge : elles sont donc mannitol-.

        Nous avons réalisé une coloration de Gram sur certaines des colonies de ce milieu. En observant au MO, nous voyons que toutes les coques sont violettes : nous avons donc bien une population de Gram+ pure.

        Nous avons ensuite effectué une lyse respiratoire. Nous avons obtenu ce résultat :

[pic 3]

On remarque que des colonies se sont développées dans l’ensemble du tube (elles sont cependant plus présentes à la surface du tube, c’est-à-dire en présence d’O2) : les coques Gram + sont donc aérobie-anaérobie facultatives.

        D.Coccosel : ce milieu sélectionne la plupart des cocci Gram+ et permet de mettre en évidence celles qui savent utiliser l’esculine en guise de sucre.

Résultats : nous observons des colonies de coques Gram+ qui sont esculine-. En effet, le milieu ne devient pas noirâtre autour de ces colonies.

        EMB : ce milieu sélectionne les entérobactéries (bacilles Gram-) et met en évidence la capacité des bactéries à dégrader le lactose.

Résultats : nous observons des entérobactéries lactose- car les colonies sont claires.

        Après coloration de Gram sur certaines colonies prélevées sur ce milieu, on constate que toutes les bactéries sont roses. Nous sommes donc bien en présence d’une population de Gram- pure.

        Nous avons par la suite réalisé un antibiogramme sur ce milieu afin de connaitre la sensibilité des bactéries à divers antibiotiques :

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