TP lipide jaune d'oeuf

1/ BUT du TP (5 points)

Le TP sur les lipides a pour but de séparer les constituants lipidiques du jeunes d’œuf pour pouvoir les identifier par chromatographie sur couche mince (CCM), en comparant les résultats obtenus avec des migrations témoins.

Nous allons ainsi caractériser la composition lipidique du jaune d’œuf.

2/ PRINCIPE

Présenter le principe des 2 méthodes utilisées (10 points)

L’extraction des lipides du jaune d’oeuf

La première est l’extraction des lipides du jaunes d’œuf par solubilisation avec un solvant organique constitué de chloroforme / méthanol (2 :1), soit 2 fois plus de chloroforme que de méthanol.

Le jaune d’œuf n’est pas seulement composé de molécules lipidiques, il y a aussi des protéines, des glucides et certaines vitamines. Quand il est ajouté au mélange 2:1, les autres constituants qui eux sont hydrophiles et donc, insolubles dans les solvants organiques, seront précipités au fond du tube à essai.

La chromatographie sur couche mince (CCM)

La seconde méthode utilisée est la chromatographie sur couche mince (CCM).

C’est une chromatographie par adsorption, une méthode physique de séparation des constituants d’un mélange basée sur la différence d’affinité des substituants vis-à-vis des deux phases en jeu, la phase stationnaire et la mobile.

Le critère de séparation est la différence de polarité qui donne une différence d’affinité pour les différente phase.

Les deux phases sont une phase solide qui est la silice, polaire, et la phase liquide ,le solvant, qui lui est apolaire.

La phase mobile va migrer du bas vers le haut par capillarité. Dans sa progression elle va entraîner les constituants du mélange s’il y a affinité avec le solvant plus ou moins apolaire.

La grandeur caractéristique est le rapport frontal, Rf , qui est égal à la distance de déplacement du soluté vis-à-vis de la ligne de dépôt (d) sur la distance totale parcourue par le solvant par rapport à la ligne de dépôt (D). Rf=d/D

Remarque: les constituants les plus apolaires se retrouveront en haut, au point le plus éloigné de la ligne de dépôt.

3/ RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION

Légender clairement les chromatogrammes et ne pas oublier de les joindre au compte rendu (les coller, les agrafer ou les mettre dans une pochette fermée avec le compte-rendu) (5 points).

[pic 1]

[pic 2]

Calculer les références frontales de tous les produits déposés sur la plaque chromatographique n°1 (CCM1) et rendre les résultats sous forme d’un tableau clair (5 points).

AG : Acide gras

MAG : Monoacylglycérol

1,3 DG : 1,3 acylglycérols

1,2 DG : 1,2 acylglycérols

TG : Triacylglycérol

JO : jaune d’oeuf

Chol : Cholestérol

PC : Phosphatidylcholine

PE : Phophatidyléthanolamine

Remarque:

• les données chiffrées entre parenthèses sont le nombre de dépôts

A partir de la CCM1, en déduire quels lipides composent le jaune d’œuf ? Quel(s) produit(s) semble(nt) majoritaires ? (10 points).

D’après la CCM1, on peut en déduire que le jaune d’œuf est composé du 1,2 DG , du 1,3 DG , TG, cholestérol, ester de cholestérol.

On peut déduire ce résultat par comparaison des rapports frontaux des solutés témoins à ceux présents dans les dépôts de jaunes d’oeuf.

On peut aussi effectué une comparaison au niveau de l’intensité des tâches pour évaluer à vu d’oeil l’importance de la substance.

Le triacylglycérol semble majoritaire par l’épaisseur de sa tâche.

Expliquer pourquoi deux chromatographies sont nécessaires pour déterminer la composition lipidique du jaune d’œuf (5 points).

Certains lipides ont trop d’affinité avec la phase polaire et ne sont pas entraîné par le solvant lui trop apolaire, mais reste sur la ligne de dépôt de la plaque de silice. Il est donc nécessaire de réaliser une autre CCM pour pouvoir les étudier avec un solvant qui est lui un peu plus polaire que le précédent (présence d’H2o) afin d’augmenter l’affinité des solutés avec le solvant et pouvoir, normalement, observer une migration des lipides.

Calculer les références frontales de tous les produits déposés sur la plaque chromatographique n°2 (CCM2) et rendre les résultats sous forme d’un tableau clair (5 points).

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