Compte rendu du TP01 d’Enzymologie

22/10/2018

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                         Compte rendu du TP01  d’Enzymologie

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                 Objectif du TP

Le but de ce TP est d’apprendre à réaliser une courbe d’étalonnage, processus qui relie le signal analytique mesuré à la concentration de l’analyte, établir un rapport numérique entre la densité optique ou absorbance (signal mesuré) et la concentration de la solution de tyrosine (analyte).

Le procédé d’étalonnage choisit doit essentiellement tenir compte d’un «effet de matrice», potentiel du milieu à doser. Il existe 3 méthodes d'étalonnage : Étalonnage externe,  Méthode des additions connues,  Méthode de l'étalon interne. La méthode qui sera retenue dans ce TP est celle Étalonnage externe 

INTRODUCTION[pic 5]

Principe du dosage colorimétrique par la méthode d’Anson

 En milieu alcalin, le réactif de Folin-Ciocalteu (mélange phosphomolybdate et phosphotungstate) réagit avec la tyrosine et le tryptophane et dans une moindre proportion avec la cystéine et l’histidine en donnant un complexe coloré bleu nuit permettant ainsi un dosage colorimétrique. C’est une méthode moyennement simple et moyennement rapide dont la sensibilité est élevée c'est-à-dire un seuil de 1 µg. La limite de linéarité de la gamme colorimétrique selon cette méthode étant< 500 µg/tube, la linéarité de la représentation graphique de la gamme sera donc respectée jusqu’à la concentration massique en tyrosine de 50 mg.L-1.

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Lors d’un dosage par étalonnage, on cherche à déterminer la concentration de l’espèce x dans la solution S (concentration molaire: [x]S en mol.L-1 ou concentration massique t en g.L-1).[pic 9]

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• Solution mère étalon de tyrosine à 0.01% dans HCl à 0,2 N à préparer à partir de tyrosine en poudre ;
• HCl à 0,2 N ;
• Na2CO3 à 0,2 % diluée dans du NaOH 0.1 N
• Réactif de Folin-Ciocalteu dilué à 50%
• Etalon de contrôle « gamme » de concentration environ 30 mg.L-1 ;
    Matériel :

-Tubes à essai - Spectrophotomètre UV-Visible   -Pipettes de 1, 2 et 5 ml  -Cuve en verre, -Micropipette 1000µl   - Balance de précision   -Béchers 100ml  - Spatules  - Agitateur             -    Vortex.

Protocole expérimental :

On dispose de 6  tubes à essaie

                                                                             Résultat

Conclusion

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