Tp de microbiologie 01 isolement de bactérie

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But :

- au cours de ce Tp on cherche a isoler et dénombré les bactéries  dans le sol

-isoler les entérobactéries qui se trouve dans cet échantillon(sol)

PRINCIPE 

    réaliser des suspensions-dilutions. à partir d’un échantillon qui est le sol . les germes contenus dans le sol seront développés. Et donner des colonie, le comptage des colonies permet par méthode de calcul simple d’estimer la quantité de germes contenue dans le sol  pour cela L’utilisation d’un milieu sélectif comme le milieu EMB(Milieu semi-sélectif/ différentiel  qui Favorise la croissance des entérobactérie et Permet de différencier entre les bactéries lacotose + , et lactose -) il nous permet le criblage des entérobactéries  présentes dans l’échantillon de sol, leur isolement, et leur purification.

Dénombrement[pic 6]

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pour GN :

LE NOMBRE DES CELLULES DANS 1 ML DE SOLUTION MERE 

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Pour les 5 g de sol en trouve (5 g dans 50 ml d eau physiologique)

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POUR 1 G DE SOL SECHE :        [pic 12]

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pour EMB :

pour ce milieu en peut pas calculer le nombre de bactéries dans le boites car le nombre de colonie  est pas  dans l’intervalle [30-300]

purification :

A partir des boites d’EMB, ou pousses les entérobactéries  on prélève les colonies l’aide d’une pipette pasteur et les ensemencer sur gélose EMB comme suit :

-Ensemencer par stries très serrées le premier demi- cercle de la boite

-Tourner l boite et Ensemencer le deuxième demi- cercle

-Tourner le boite Ensemencer le troisième demi-cercle

-Faire un Z final vers le centre de la gélose

         -Cultiver les boites pendent 24—48 h a 37°C.  

Conclusion :

     Le sol est un environnement vivant et constitue un réservoir exceptionnel de microorganismes tel que les les entérobactéries

    Quelque informations sur les entérobactérie :

• -sont des bacilles  gram ( –)
• sont aréo-anaérobie  
• -mobile /immobile
• -fermentent le glucose
• -réduisent le nitrate en nitrite
• -dépourvus d’oxydase
• Des bactérie ubiquitaire (milieu humide (sol .eau)commensales (intestin d’homme ))
• -Les espèces les plus communément isolées sont :

 ---> Citrobacter,   Enterobacter,   Escherichia,-Hafnia,  Klebsiella,   Morganella, - Proteus, - Providencia, - Salmonella, - Serretia,- Shigella, - Yersinia 

• -Facilement cultivable :

       ---> Ils développent rapidement in vitro sur le milieu ordinaire avec température optimal

            37 º leur temps de division est entre 20-40 min  

• Sont différencies sur la base de caractères biochimique a laide de galerie ( fermentation des sucres décarboxylation des acides amines utilisation de citrate )

• Les technique d’isolement :

→milieu EMB :destiné aux entérobactéries ( éosine est inhibiteur de gram (+) et bleu de méthylène est un indicateur de ph ) c’est un milieu semi-sélectif/ différentiel qui Favorise la croissance des bactéries à Gram (- ),Permet de différencier entre les bactéries lacotose + , et lactose –

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