TP microbiologie

La microbiologie est une sous-discipline de la biologie consacrée à l'étude des micro-organismes, constitués d’un groupe extrêmement diversifié d'organismes microscopiques répartis dans les trois domaines du vivant (eubactérie, archée et eucaryote). Lors des tp de microbiologie, nous nous sommes essentiellement intéressés aux bactéries ainsi qu’aux méthodes d’observations de bactéries dans des échantillons naturels, au microscope ou dans des milieux gélosés.

Au cours des trois tps, nous avons pu effectuer les manipulations suivantes :

Manipulation 1 : étude d’un mélange bactérien avec un état frais et une coloration de Gram et un ensemencement sur milieux GNO, EMB, CHAPMAN et D-COCCOSEL

Manipulation 2 : test antibiogramme sur des bactéries Gram –

Manipulation 3 : test respiratoire sur des bactéries Gram +

Manipulation 4 : dénombrement de bactéries dans une crème glacée

Manipulation 5 : coloration des spores

Manipulation 6 : coloration de Gram sur yaourt et frottis buccal.

Ce compte-rendu de tp retracera les étapes importantes des tps, nos observations et nos interprétations.

I. Première Séance

La première séance était centrée sur l’étude d’un mélange bactérien d’abord avec un état frais puis une coloration de Gram et un ensemencement sur différents milieux.

Nous avons tout d’abord effectué un état frais afin d’observer la mobilité des bactéries présentes. On y trouve des coques et des bacilles, tous deux transparents et certains se déplaçant très rapidement. Leur forme est assez difficile à observer.

Nous effectuons une coloration de Gram, colorant les bactéries Gram + en violet et les bactéries Gram – en rose par l’utilisation de plusieurs colorants et une différenciation à l’alcool-acétone au cours de la coloration. Les bactéries Gram + ont une paroi plus riche en peptidoglycane que la paroi d’une bactérie Gram – qui possède en plus une membrane externe. Le violet de gentiane colore toutes les bactéries et le lugol fixe ça. Intervient alors la différenciation, avec l’alcool acétone qui décolore la paroi plus fine des Gram – et permet à la contre coloration, la fuschine, d’être effective sur elles. On peut alors observer la forme des bactéries mortes et différencier leur Gram.

On retrouve des coques et de bacilles, respectivement Gram + et Gram – sous forme de diplocoques, streptocoques, microcoques, diplobacilles et streptobacilles.

Les coques Gram – sont des bactéries pathogènes.

Dessin d’observation d’une coloration de Gram au microscope photonique (x1000)

A la fin de la séance, nous avons procédé à l’isolement par stries d’épuisement sur des milieux gélosés non sélectifs et sélectifs, les milieux GNO (non sélectif), EMB, CHAPMAN, D-COCCOSEL (sélectifs). Ceci permettra l’observation et la description des types de colonies.

II. Deuxième Séance

La séance a commencé par l’observation des colonies de bactéries sur les différents milieux, avec le milieu GNO en premier.

GNO

C’est un milieu non-sélectif, Gélose Nutritive Ordinaire permettant la culture de toutes les bactéries et la description des diverses colonies.

Colonie 1

Colonie

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