TP de physiologie végétale

Tp physiologie 2, pigments :

3. Chromatographie sur couche mince :

Pour séparer les différents pigments que contiennent nos thylacoïdes, nous allons effectuer une chromatographie sur couche mince des pigments. Une chromatographie sur couche mince des pigments (CCM) est une technique de séparation des pigments qui permet d’isoler et d’identifier les différents pigments présents dans un mélange. Les pigments sont séparés à travers une phase stationnaire qui est composé de silice et qui recouvre une plaque de verre. On utilisera aussi un solvant approprié pour dissoudre les pigments et pour servir d’éluant pour la migration des pigments à travers la phase stationnaire.

En chromatographie sur couche mince , les pigments qui ont une polarité plus élevée (plus polaires) ont une plus grande affinité pour la phase stationnaire (gel de silice ou cellulose) et restent plus longtemps sur la plaque. Les pigments moins polaires ont une affinité moindre pour la phase stationnaire et se déplacent plus rapidement sur la plaque. Par conséquent, les pigments qui se déplacent le plus loin sur la plaque sont généralement les pigments les moins polaires.

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Ici nous allons calculer le rapport frontale des sept différents composés, qu’on a obtenue grâce à la chromatographie sur couche mince, d’après les mesures que nous avons effectué en amont durant le Tp :

Le rapport frontal est une valeur qui permet de quantifier la mobilité relative d’un composé dans une chromatographie sur couche mince. Il est calculé en divisant la distance parcourue par le composé (depuis le point d’application jusqu’à la frontière du solvant) par la distance parcourue par le solvant depuis le point d’application.

Le rapport frontal dépend de plusieurs facteurs tels que la polarité relative du composé et du solvant utilisé, la nature de la phase stationnaire, la température, la concentration de la solution, etc. Dans le cas de la CCM des pigments, les caroténoïdes ont généralement un RF plus élevé que les chlorophylles, car les caroténoïdes sont en général moins polaires que les chlorophylles.

Cependant, il est important de noter que le RF peut varier en fonction des conditions expérimentales et des types de caroténoïdes et de chlorophylles impliqués. Par conséquent, il est important de prendre en compte plusieurs facteurs lors de l’interprétation des résultats de la chromatographie sur couche mince des pigments.

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