TD culture cellulaire

1. Test MTT (MTT assay)

Signification du terme MTT :

3- (4,5-diMéthylthiazol-2-yl) -2,5-diphénylTéTrazolium de bromure

Différentes utilisations du test MTT :

• Quantification de la croissance et de la viabilité cellulaires
• Mesure de la prolifération cellulaire en réponse aux facteurs de croissances, aux cytokines et aux nutriments
• Mesure de la cytotoxicité (quantification des effets du facteur de nécrose tumorale-a ou -b, évaluation des agents cytotoxiques, ou inhibiteurs de croissance : les anticorps inhibiteurs par exemple)

Principe du test :

C’est un test colorimétrique qui est basé sur la réduction d’un sel : jaune de tétrazolium, en cristaux de formazan violets, par des cellules métaboliques actives. Il est non radioactif

En effet, les cellules viables contiennent des enzymes oxydoréductases dépendantes de NAD(P)H qui sont capables de réduire le MTT en formazan. On pourra alors quantifier l’absorbance (à 500-600 nm) de la solution colorée résultante, à l’aide d’un spectrophotomètre multi-puits.

Plus la solution sera de couleur foncée, plus le nombre de cellule viable et métaboliquement actives sera élevé.

1. Test XTT (XTT Assay)

Signification du terme XTT :

C’est un dérivé de tétrazolium

Différentes utilisations du test XTT :

• Mesure de la prolifération cellulaire en réponse aux facteurs de croissances, aux cytokines, aux mitogènes et aux nutriments
• Analyse des composés cytotoxiques et cytostatiques (médicaments anticancéreux ou bien d’autres composés pharmaceutiques par exemple
• Evaluation des anticorps inhibiteurs e croissance et des médiateurs physiologiques qui inhibent la croissance cellulaire.
• Réaliser des tests

• De biocompatibilité de divers éléments utilisés dans l’ingénierie du tissus osseux, ou bien pour la croissance des cellules osseuses.
• De viabilité cellulaire

Principe du test :

Ce test est basé sur le clivage du sel de tétrazolium XTT (par le système succinate-tétrazolium réductase appartenant à la chaîne respiratoire des mitochondries des cellules) lorsque celui-ci est en présence d’un réactif de couplage électronique, qui produit un sel de formazan soluble. Cela ne se retrouve quand chez les cellules viables et métaboliquement intactes.

Les cellules cultivées dans une plaque de culture tissulaire (96 puits) sont incubées avec la solution de marquage XTT. Le colorant formazan formé pourra alors être quantifié avec un spectrophotomètre multi-puits à balayage (qui est un lecteur ELISA). L’absorbance mesurée peut alors être mis en lien avec le nombre de cellules viables.

1. Test WST-1 (XTT Assay)

Signification du terme WST-1 :

Différentes utilisations du test WST-1 :

• Mesure de la prolifération cellulaire en réponse aux facteurs de croissances, aux cytokines, aux mitogènes et aux nutriments
• Analyse des composés cytotoxiques et cytostatiques (médicaments anticancéreux ou bien d’autres composés pharmaceutiques par exemple
• Evaluation des anticorps inhibiteurs e croissance et des médiateurs physiologiques qui inhibent la croissance cellulaire.
• Réaliser des tests

• De biocompatibilité de divers éléments utilisés dans l’ingénierie du tissus osseux, ou bien pour la croissance des cellules osseuses.
• De viabilité cellulaire

Principe du test :

Ce test est basé sur le clivage du sel de tétrazolium stable WST-1 en formazan soluble grâce à un mécanisme cellulaire complexe qui se produit principalement à la surface cellulaire. Cette bio réduction dépend de la production glycolytique de NAD(P)H des cellules viables. Il y a donc un lien entre la quantité de colorant formazan fabriqué et le nombres de cellules métaboliquement actives dans la culture.

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