Test histamine rapide

Test histamine rapide (Farines de poisson)

Préparation de solution tampon de lavage

Diluer les 20 mL de tampon de lavage (Wash Buffer) concentré, avec l’eau distillée pour obtenir un volume final de 1000 mL. Conserver la solution de lavage à 2 – 8 °C.

Préparation d’échantillons / Extraction

1. peser 10g de farine de poisson dans 240 ml d’eau distillée ou déminéralisée et agiter pendant 10 minutes à la température ambiante.

2. Pipeter 1 mL de surnagent centrifuger ou filtrer l’échantillon  

3. Prener 50 μL d’échantillon pour l’acylation.

Test Qualitatif

Pour un test qualitative, choisir le standard que vous avez besoin, parmi les standards fournis avec le kit.  Les standards du kit ont les concentrations suivantes : 3, 10, 20, 30, 50, 100 ou 300 ppm.

Test quantitatif

Pour un test quantitative, utiliser les standards suivants fournis avec le kit : 0, 3, 10, 30, 100

 et 300 ppm.

Acylation

Note: tous les réactifs et les composants du kit doivent êtres à température 20-25°C avant utilisation pour l’étape acylation et analyse. Pour éviter toute contamination, le block Master (plaque de préparation) est pour usage unique.

1. Pipeter 50 μL de standards et extrait d’échantillons dans les puits correspondants de la plaque

2. ajouter 1.5 mL du tampon  d’acylation (Acylation buffer) (avec une seule étape de pipetage –sans agitation) dans chaque puits (standards et échantillons).

3. Pipeter 50 μL de réactif d’acylation (Acylation Reagent) dans chaque puits. (Changement de la couleur du jaune au rose) Continuer sans aucun retard jusqu’à étape 4.

4.  Incuber 5 minutes à température ambiante (20-25°C) sur un agitateur (avec une vitesse de rotation d'env. 600 rpm), alternativement ; agiter doucement à la main et incuber 10 minutes. Assurez-vous que le mélange est complet (légère couleur rose). Prenez 50 uL pour le test ELISA.

ANALYSE

Il est recommandé qu'une pipette à 8 canaux est utilisé pour effectuer le test. Si une pipette à 8 canaux n'est pas utilisé (c'est à dire en utilisant uniquement des pipettes monocanales), il est recommandé ne pas analyser plus de 16 échantillons au total.

1. Pipeter 50 uL de standards et d’échantillons acylés  dans les puits de la microplaque histamine.
2. Pipeter 100 uL de conjugué antisérum histamine (Histamine Antiserum Conjugate)

 dans chaque puits.
3. Incuber 10 minutes à température ambiante (20-25 ° C) sur un agitateur (avec une vitesse d'env. 600 rpm) alternativement ; agiter doucement à la main et incuber pendant 20 min

4. Vider le contenu des puits et lavez chaque puits 3 fois à fond avec 300 ul de tampon de lavage. Après le dernier lavage, expulser l'eau résiduelle en frappant la plaque retournée sur du papier absorbant. Sécher le fond des puits avec un chiffon sec ou une serviette.
5. Pipeter 100 uL de substrat dans chaque puits.
6. Incuber pendant 10 min à température ambiante (20-25 ° C) sur un agitateur (avec une vitesse d'env. 600 rpm), sinon incuber 20 minutes (15min si la température est suffisante). Éviter l'exposition à la lumière directe du soleil!
7. Ajouter 100 ul de solution stop dans chaque puits et agiter la plaque de microtitration doucement à la main pour assurer une répartition homogène de la solution.
8. Lire l'absorbance de la solution dans les puits dans les 10 minutes, en utilisant un lecteur de microplaques avec une longueur d'onde de 450 nm à lire.

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