Bactéries génétiquement modifiées

Christina axarlis, julie charbonet,

Lusiana Lusianu

Expérience :

 Bactéries génétiquement modifiées  

But :

Modifier une bactérie génétiquement pour la rendre  lumineuse.

 Matériels :

- 2 tubes

- pipettes

- plasmides

-incubateur

- 2 boites de pétri avec antibiotiques

- 2 boites de pétri sans antibiotiques  

- vortex

- bec bunsen

- baguette en verre

- bac de glace

- chronomètre

Protocole :

• Prendre 2 tubes dans la glace, marquer un « + » sur l’un et un « - » sur  l’autre.

• Faire fondre la glace des deux tubes avec la chaleur de ses mains, pour pouvoir y rajouter le plasmide.

• Ajouter 8µl d’ADN, sur le tube ou il a un «+», il faut prendre la pipette P20 et la régler sur 080.

• Ensuite mettre le tube Marquer «+», et «-» dans la glace 15 minutes

• Puis incuber les tubes 2 minutes à 42° C

• Remplacer les tubes dans la glace pendant 5 minutes.
• Ajouter 1 ml de LB dans chaque tube et incuber la suspension à 37° C pendant 30 minutes. Utiliser la pipette P1000, et la régler sur 100.

• Prendre 2 boites de pétri avec antibiotique contenant de l’ampicilline qui sont marquées par un trait  et 2 boites sans antibiotiques, marquer sur le couvercle les «+» et les «-» sur chaque boites.

• Prélever avec la pipette p1000 et régler sur 0.1, déposer et étaler avec un râteau stérilisé au bec bunsen.

1. 0.1 ml du tube «+» sur la boite LA avec antibiotique.  
2. 0.1ml du tube «+» sur la boite LA sans antibiotique.
3. 0.1ml du tube «-» sur la boite LA avec antibiotique.
4. 0.1ml du tube «-» sur la boite LA sans antibiotique.

• Poser les boites à l’envers dans l’incubateur à 37°C

Résultat :

Conclusion :

En Conclusion nous pensons que si notre expérience a été rater il ce peut que ce soit un problème de dosage (Ex : mauvaise pipette ou mauvais réglage de pipette), ou un problème de temps (Ex : qu’on n’a pas bien respecté bien respecter le temps indiquer dans le protocole), ou un problème de mélange (Ex : nous n’avons pas bien mélangé le plasmide dans les tubes), ou encore que nous avons trop chauffé le râteau pour stériliser ce qui a peu être tuer les bactéries et c’est peu être pour toutes ses raisons la que aucune de nos boites n’a eu de bioluminescence.

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