Etude sur les jus d'ananas

                                                     PLAN

INTRODUCTION

TP N°1: EXTRACTION DE L’ADN

• Objectifs
• Principes
• Matériels et méthodes
• Résultats et interprétation

TP N°2: DIGESTION ENZYMATIQUE

• Objectif
• Principe
• Matériels et méthodes
• Résultats et interpretation

                                              CONCLUSION

INTRODUCTION

A  la fin des cours théoriques de biologie moléculaire, les travaux pratiques sont prévus pour voire le concret et toucher du doigt  quelques notions de cette science qui est aujourd’hui au centre de la recherche scientifique et des diagnostiques médicaux. Pour cela un TP d’extraction de l’ADN et digestion  enzymatique est prévu dans le Laboratoire de Biologie et de Typage Moléculaire en Microbiologie (LBTMM).

TP N°1 : Extraction d’ADN

Objectif : Extraire de l’ADN de la tomate

PRINCIPE : en présence  du sel ; de liquide vaisselle ; et de  l’éthanol dans un broyat, l’ADN se précipite    

• Matériel utilisé : matériel végétal (tomate)

[pic 1]

• sel ; liquide vaisselle ; éthanol

• coton hydrophile ; mortier et pilon

• Mode opératoire :

• Peser 10g de matériel végétal (Peau d’orange)
• Broyer dans un mortier
• Préparer la solution de lyse  en prenant (0,5g) 10% de sel de cuisine dans un tube Falcone au quel on ajoute 22,5ml d’eau distillée.
• Compléter 2,5 de savon liquide (liquide de vaisselle) dans ce tube et Obtention de 25ml au total de la solution de lyse.

• Verser cette solution sur le broyat puis mélanger en broyant en plus jusqu'à obtenir un mélange homogène.
• Filtrer ce broyat obtenir à l’aide du coton hydrophile et recueillir ce filtrat ici dans notre cas 15 ml dans un tube Falcone.
• Rajouter lentement un volume égale d’éthanol (15ml)  en veillant à ne pas le mélanger au filtrat. On obtient deux (2) phases.
• Agiter légèrement sans mélanger les deux phases et laisser remonter le précipité blanc d’ADN vers la surface du tube

NB : Pour avoir une meilleure agitation, tapoter légèrement le bas du tube à essai avec les doigts

On peut enfin :

• Recueillir l’ADN à l’aide d’une pipette Pasteur, le déposer dans un verre de montre contenant du vert de méthyle acétique pour le colorer et ensuite le rincer

•   Utilités du broyage, de la liquide vaisselle, du sel et de l’éthanol)

• Le broyage permet la lyse des cellules
• Le sel absorbe une partie de l’eau contenue dans les cellules et permet la séparation des acides nucléiques des protéines
• Le liquide vaisselle a pour rôle d’éliminer les lipides composant les membranes cellulaires
• L’éthanol permet aux acides nucléiques de se rassembler en pelotes

Résultat et interprétation

[pic 2][pic 3][pic 4][pic 5]

Observons le surnageant dans notre tube Falcone on devrait voir  un pélot qui est notre acide nucléique. Ici dans notre cas de la t l’ADN  est resté au milieu du flacon c’est à-dire entre le liquide de vaisselle et l'alcool qui est le surnageant.

 TP N°2: DIGESTION ENZYMATIQUE(GROUPE3)

• OBJECTIF

Dans  le  but  de  digérer  l’ADN  par  des  enzymes  de  restrictions, nous  avions Utilisé dans le cadre de ce TP plusieurs fragments d’ADN et deux enzymes de restriction différentes.

• PRINCIPE

En présence d’une ou plusieurs fragments d’ADN avec des enzymes de restriction dans un mélange, ces enzymes reconnaissent des cites qui leurs sont spécifiques et coupent a ces endroits.

• MATERIELS ET METHODES

               Incubateur, balance à précision, bécher, cuivre de migration ; plaque                                      chauffante, les peignes, pince, erlenmeyer, bec bunsen.

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