Tp Lipides

Compte rendu TP Extraction & caractérisation des lipides du jaune d’oeuf.

I) But :

Le but de ce TP consiste d’abord en l’extraction des lipides du jaune d’œuf lyophilisé. Dans un second temps, nous procéderons à la séparation et à la caractérisation de ces lipides via deux chromatographies sur couches minces ayant chacune un solvant différent. Enfin la caractérisation des différents lipides présents dans le jaune d’œuf sera faite par comparaison avec des lipides témoins.

II) Principe :

Pour extraire les lipides du jaune d’œuf, il a fallu mélanger une certaine quantité de jaune d’œuf en poudre avec une solution de méthanol/chloroforme dans un tube à essai . Les composés solubles du jaune d’œuf ont migré dans la solution et les composés insolubles ( protéines) sont tombés au fond du tube à essai. Les lipides, principalement les acides gras (au caractère amphiphile) se sont solubilisés dans le surnageant.

Ensuite, 2 chromatographies sur couche mince (CCM) ont été effectué. La chromatographie sur couche mince est un procédé permettant la séparation des divers composés chimiques d’un mélange (dans notre TP, les lipides contenus dans le jaune d’oeuf). Elle est basée sur les différences d’affinité des substrats à l’égard de deux phases, l’une stationnaire ou fixe, l’autre mobile. Ici, la phase mobile est définie par le mélange hexane/éther diéthylique/acide acétique pour la chromatographie n°1 et par le mélange dichlorométhane/éthanol/eau pour la chromatographie n°2. La phase fixe étant composé de gel de silice. La méthode visant à utiliser deux solvants différents permet de révéler certaines migrations que l'on ne verrait pas avec un autre car s'il le premier solvant n’est pas assez polaire , on ne verra pas de résultats.

On dépose sur la phase fixe une petite quantité de la solution à analyser puis on met cette phase au contact de la phase mobile. La phase mobile migre de bas en haut, par capillarité, le long de la phase fixe en entraînant les constituants du mélange. C’est le phénomène d’élution, qui permet la séparation des constituants du mélange à analyser.

Cette séparation repose sur l’affinité variable des composants pour l’une ou l’autre des deux phases. Lors de la migration, les composés déposés sur la phase fixe vont être entrainés par la phase mobile lors de sa migration. En fonction de leur affinité avec chacune des deux phases, les composés vont être plus ou moins retenus et vont donc parcourir des distances de migration différentes.

Ainsi le composé migrera d’avantage s’il possède une forte affinité pour le solvant. Autrement dit plus un lipide sera polaire plus il va migrer le long de la plaque de silice vers la ligne de front, car il présentera d’avantages d’affinité pour la phase mobile. A l’inverse plus un lipide sera apolaire plus il restera proche de la ligne de dépôt.

III) Résultats et interprétation :

Protocole de l’expérience

1. EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D’OEUF:

1) Peser environ 50 mg de jaune d’œuf lyophilisé.

2) Ajouter 1 ml de mélange chloroforme/méthanol (2:1) à la poudre de jaune d’oeuf, boucher le tube, agiter 30 secondes au Vortex. Après décantation, le contenu du surnageant est analysé par chromatographie sur couche mince (gel de silice).

2. PREMIERE CHROMATOGRAPHIE:

1) A l’aide d’un capillaire (un capillaire par produit), déposer sur une plaque de chromatographie chacun des témoins ainsi que le surnageant obtenu précédemment, dans les quantités voulues et en prenant une graduation par produit.

2) Préparer 20 ml d’éluant hexane/éther diéthylique/acide acétique (70:30:1 soit 13,86mL d’hexane; 6mL d’éther diéthylique et 0,2mL d’acide acétique), puis le transvaser en totalité dans la cuve chromatographique. Homogénéiser puis laisser reposer quelques minutes pour la saturation de la cuve.

3) Déposer la plaque dans la cuve et laisser migrer l’éluant jusqu’à 1 cm du bord

supérieur de la plaque (on notera le front de solvant à la sortie de la cuve). Quand l’éluant est totalement évaporé, tremper successivement la plaque de silice dans la solution de bleu de comédie (révélatrice des lipides) puis dans une solution de NaCL (décoloration) et la sécher complètement après quelques minutes.

4)

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