TP Dosage des macromolécules biochimiques

Rapport de TP 1 : DOSAGE DES MACROMOLECULES BIOCHIMIQUES : ACIDES NUCLEIQUES, PROTEINES ET GLUCIDES

1. Introduction

Ce travail pratique a pour but l’identification de macromolécules biochimiques mais aussi la détermination des concentrations de ces macromolécules. Nous allons notamment nous intéresser au dosage des acides nucléiques, des protéines et des glucides.

Ainsi, l’utilisation de diverses méthodes de dosage sera nécessaire, par exemple : la spectrophotométrie, la méthode Bradford ou encore le réactif au Glucose RTU.

 Les résultats que nous auront obtenus par mesures et par calculs nous permettra de confronter, d’expliquer et de discuter ces résultats.

1. Matériel et méthodes

 cf. polycopier de Tp de biochimie

1. Résultat

Nous avons commencé ce TP par l’identification des trois solutions inconnues X1, X2 et X3.

Le premier test, le test Bradford, nous a donc permis de déterminer laquelle des trois solutions comprenait des protéines.

Ce test colorimétrique est réalisé grâce au bleu de Coomassie. Ce dernier interagit avec les molécules hydrophobes et la solution devient donc bleu en cas de présence de molécules hydrophobes. L’ADN ainsi que les glucides ne sont pas hydrophobes, c’est donc seulement en présence de protéines que la solution deviendra bleue.

Après réalisation de ce test, on observe une coloration du tube numéro 3 contenant la solution X2 en bleu. On peut en conclure qu’il s’agit de la solution contenant les protéines.

        Le second test, le test au réactif de glucose RTU, nous a lui permis de déterminer quelle solution contenait les glucides.

Ce test colorimétrique ou enzymatique, est réalisé par réaction enzymatique. On obtiendra grâce au glucose oxydé et a une molécule colorée (ou chromogène) une coloration rouge/rose dans un des tubes.

Après réalisation de ce test, on observe une coloration du tube numéro 2 contenant la solution X1 en rouge/rose. On peut en conclure qu’il s’agit de la solution contenant les glucides.

        Le troisième et dernier test d’identification, est un test de contrôle de la présence d’acides nucléiques. Il s’agit ici de valider la présence d’acides nucléique dans la solution qui n’a pas encore réagit, la solution X3.

Ce test est réalisé à l’aide de sel et d’éthanol. Cela permet de favoriser les interactions avec les molécules d’acides nucléiques plutôt qu’avec l’eau, on aura donc la formation d’un précipité s’il y a présence d’acides nucléiques.

Après réalisation de ce test, nous observons la formation d’un précipité dans le tube numéro 4 contenant la solution X3. On peut en conclure qu’il s’agit de la solution contenant les acides nucléiques.

Nous avons ensuite déterminé la concentration de ces trois macromolécules dans les solutions.

        Le premier dosage était celui des acides nucléiques. Ce dosage est un dosage direct puisque nous mesurons directement l’absorbance des acides nucléiques dans un spectrophotomètre à UV.

Cette absorbance directe est rendue possible grâce aux bases azotées présentent dans les acides nucléiques qui absorbent le rayonnement à 260 nm.

Les autres longueurs d’onde nous serviront à analyser la pureté de la solution.

Voici la courbe du spectre d’absorption de la solution d’acides nucléiques que nous avons pu tracer grâce à nos résultats.

[pic 1] 

Figure 1 : graphique du spectre d’absorption de la solution d’acides nucléiques.

Nous avons donc calculé la concentration de la solution X3 en acides nucléiques.

DO(x)/DO(260) = C(x)/ C(260)  donc  0,505/ 1 = C(x)/50

Donc C(x) = 25,25 microlitres/mL

C1 = (C2 x V2)/V1 donc C1 = 1,2 g/L

Nous trouvons une concentration de 1,2 g/L en acides nucléiques pour la solution inconnue X3.

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