La caséine, une protéine essentielle du lait.

Chromatographie sur couche mince.

Principe 

Deux tripeptides provenant de la solution de caséines hydrolisée ont été isolés. Pour étudier quels sont les acides aminés qui les composent nous utiliserons la chromatographie de partage sur couche mince. Dans cette chromatographie, une phase est stationnaire et correspond au support polaire qui est de la cellulose fixée sur un film plastique. Tandis qu'un solvant apolaire qui migre le long de la phase stationnaire par capillarité est considérée comme une phase mobile. Plus l'affinité des acides aminés (qui dépend de la structure chimique de leur chaîne latérale) tend pour la phase apolaire, plus ils migreront sur le support. Pour ceux dont la structure ayant le plus d'affinités pour la phase polaire, moins ils migreront.

Protocole

-Tracer légèrement au crayon une ligne de dépôt à 2 cm du bord du film, puis tracer sur la ligne un repère tous les 1cm (19 repères).

-Déposer à l'aide de capillaires chaque acide aminé connu (14) et deux fois chaque hydrolysat de tripeptide (au cas ou l'un ne fonctionne pas bien).

-Placer le film dans une cuve contenant du butanol, sous une hotte aspirante.

-Lorsque la phase mobile atteint les ¾ du film, le retirer de la cuve et tracer délicatement au crayon le front du solvant.

-Après avoir laissé le solvant sécher, calculer le Rapport frontal de chaque acide aminé et des tripeptides (Distance parcourue par le composé/Distance parcourue par le solvant).

-Comparer les résultats obtenus en fonction du Rapport frontal et de la caractéristique (couleur, forme) de chaque composé pour identifier la compositions des tripeptides.

Introduire la CCM fait en tp

Sur cette chromatographie effectuée durant le TP nous pouvons voir que le Mélange n°1 (Me1) est composé de Ser, de Ala et de Phe. Tandis que dans le Mélange n°2 (Me2) nous retrouvons le Lys, la Proline divisée en deux parties et la Val.

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