Identification d’une ENTEROBACTERIACEAE

Compte Rendu de TP de Microbiologie n°2 :

Identification d’une ENTEROBACTERIACEAE

A travers cette séance de travaux pratiques, nous avons identifié une Enterobacteriaceae au milieu de quatre souches différentes, à l’aide de critères morphologiques microscopiques et macroscopiques, de leurs mobilités, du résultat de la coloration de Gram, du type respiratoire, de besoins nutritionnels et enfin de la température de croissance optimale.

Nous savons qu’une souche caractéristique d’une Enterobacteriaceae est de type bacille, Gram négatif, Oxydase -, Aéro-Anaérobie Facultative, glucose +, nitrate réductase + et de culture facile, non exigeant.

1. Repérage de la souche d’Enterobacteriaceae :

1. Examen à l’état frais des 4 souches inconnues A,B,C,D :

Au préalable nous avons réalisé une suspension bactérienne de ces quatre souches à partir d’une culture de gélose.

Un examen à l’état frais, consiste à observer au microscope les quatre souches A,B,C,D sans coloration.

Dans un premier temps, nous avons réalisé la préparation microscopique à l’aide de la suspension bactérienne. Or, notre choix n’était pas judicieux car nous avons eu de la difficulté à observer et trouver des bactéries sur nos lames.

Nous avons donc obtenu un résultat que pour une seule souche, la souche A qui était la plus facile à observer.

Résultat pour la Souche A :

Observation Microscopique à l’objectif x100 :

[pic 1][pic 2]

Nous pouvons donc déjà supposer que la Souche A n’est pas une bactérie de type Enterobacteriaceae car elle est représentée sous forme de coque et non de bacille.

1. Examen des 4 souches inconnues A,B,C et D après coloration de Gram :

Elle permet l’étude microscopique des bactéries mortes après fixation et coloration. La coloration de GRAM permet de différencier des bactéries dites Gram + de bactéries dites Gram -.

Cette méthode permet d'observer :

• la MORPHOLOGIE des bactéries

• le TYPE D’ASSOCIATION
• la COULEUR : gram + ou –

Résultat pour la Souche A après coloration de GRAM :

[pic 3]Observation Microscopique à l’immersion à l’objectif x100 :

[pic 4]

Résultat pour la Souche B après coloration de GRAM :

Observation Microscopique à l’immersion à l’objectif x100 :

→ Nous pouvons donc en déduire que la souche A et B ne font pas parties de la famille des Enterobacteriaceae car elles sont toutes les deux de types coques et ont une coloration violette, ceux sont des bactéries à GRAM +.

Résultat pour la Souche C après coloration de GRAM :

[pic 5][pic 6]

Résultat pour la Souche D après coloration de GRAM :

1. Recherche de la catalase et de l’oxydase :

1. L’oxydase :

Ce test permet de mettre en évidence une enzyme : la phénylène diamine oxydase des bactéries à partir de leur culture en milieu gélosé.
Cette enzyme est capable d’oxyder un réactif : le N diméthyl paraphénylène diamine.
Ce réactif est incolore et en présence de l’enzyme, il libère un composé rose-rouge, noircissant à l’air. Ce test est essentiel pour orienter l'identification des bacilles et coques Gram -. Nous allons donc réaliser cette expérience sur la souche C et D afin de confirmer notre jugement.

Résultat après le test OXYDASE :

[pic 7]

La souche D est donc une oxydase -, elle est donc fort probable qu’elle appartenienne à la famille des Enterobacteriaceae.

1. La catalase :

La catalase est une enzyme qui catalyse la dégradation du peroxyde d'hydrogène (H2O2), produit toxique du métabolisme aérobie de nombreuses bactéries, en H2O et 1/2 O2.

H2O2     [pic 8]    H2O + 1/2 O2

La recherche de la catalase est un test fondamental pour l'identification des bactéries à Gram +.

Résultat après le test CATALASE :

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