Etude bactériologique

I-Matériel utilisé :

1-Boîte de Petri :

10cm de diamètre, en plastique, stériles elles servent à ensemencer ou isoler les microorganismes après coulage des milieux de cultures gélosés.

2-Tubes à essais :

Tubes en verre fermés à un bout servent à réaliser des expériences sur de petites quantités ou à contenir des prélèvements (Urines dans le Tp n°2). Utilisés lors du tp de l’antibiogramme pour préparer la suspension bactérienne à partir de notre milieu de culture.

3-Pipette pasteur :

Tube fin de verre dont l’extrémité a été effilée pour obtenir une pointe ouverte. On porte la partie près de l’extrémité terminale de la pipette au sommet du Bec Bünsen lorsque le verre devient un peu mou, on tourne de sorte à créer la boucle d’ensemencement.

4-Bec Bünsen :

La chaleur produite stérilise l’atmosphère au dessus de la flamme, le courant d’air ascendant qui se produit autour du bec empêche la retombée de poussières de germes. On obtient une zone de protection circulaire de 15cm de diamètre autour du bec. Il faut travailler qu’avec la flamme bleue.

5-Ecouvillion microbiologique :

Stérile en plastique, utilisé pour ensemencer lors du tp de l’antibiogramme.

6-Etuve :

Incuber les boîtes.

7-Refrégirateur

Conserver les boites au frais afin d’empêcher les microorganismes de se développer. Utilisé lors de plusieurs Tp car l’utilisation de nos boîtes n’est pas immédiate.

TP n°1 : Coulage des géloses sur boîte de Petri

Matériel utilisé :

-Bec Bünsen

-Boîte de Petri

-Bain marie (Faire fondre le milieu)

But du tp :

Obtenir des milieux de culture prêts à être ensemencer.

Les milieux de culture utilisés :

Gélose nutritif :

C’est milieux solide de base qui permet la mise en culture des bactéries non exigeantes, c’est un milieu d’isolement non sélectif.

Gélose Chapman :

C’est un milieu sélectif qui permet la croissance des germes halophiles (c-à-d qui aiment le sel) car il contient une grande quantité de Chlorure de Sodium. Dans ce milieu, les colonies fermentant le Mannitol sont entouré d’un halo jaune.

Gélose Mac Conkey :

Milieu solide sélectif pour l’isolement des bacilles à Gram négatif ainsi que les coliformes dans les eaux.

Gélose cétrimide

Milieu solide sélectif permettant l’isolement des Pseudomonas.

Comment couler les boîtes :

-On doit toujours travailler dans le périmètre stérile autour du bec Bünsen.

-Dévisser le bouchon du flacon contenant le milieu de culture (après avoir fait fondre au bain marie) et éviter de le mettre sur la paillasse.

- Entrouvrir la boîte de Petri à couler, celle-ci doit être à gauche.

-Flamber l’ouverture du flacon afin d’éviter les contaminations.

-Verser la gélose liquide à l’intérieur de la boîte de façon à couvrir le fond.

-Laisser la boîte à moitié entrouverte en direction de la flamme afin d’éviter la formation de vapeur d’eau.

-Avant de refermer le flacon, on passe le bout 3 fois sur la flamme du bec.

-Faire glisser les boîtes sur une zone plus froide de la paillasse puis le refermer une fois solidifiées.

-Retourner les boîtes pour empêcher l’eau accumulée sur le couvercle de retomber sur le milieu.

-Stocker les boîtes retournées au frais pour éviter la prolifération des germes en attendant l’ensemencement (à eu lieu le lendemain).

Tp n°2 : Ensemencement

Matériel utilisé :

-Boîtes de Petri coulées précédemment.

-Bec Bünsen.

-Pipette pasteur.

-Etuve

But :

Ensemencer les différents milieux à partir d’un prélèvement infecté par des bactéries dans le but de les identifier après une étude macro et microscopique.

Technique d’ensemencement :

-L’ensemencement doit se faire à l’intérieur du périmètre de sécurité autour du bec et tout doit être placé à gauche du manipulateur.

-Former la boucle d’inoculation avec la pipette dans la flamme du bec.

-Bien agiter le flacon avant de l’ouvrir et flamber l’ouverture.

-Flamber la pipette et la boucle formée 3 fois dans les flammes.

-Déposer l’inoculum en un point périphérique et l’étaler en stries très serrées puis flamber la pipette et la laisser refroidir.

-Tourner la boîte d’un quart de tour et toucher en un seul point les stries faites précédemment et ensemencer le quart

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